[其他]生產有用物質的方法

無效

• 申請號: 85104701
• 申請日: 1985-06-19
• 公開（公告）號: CN85104701A
• 公開（公告）日: 1986-12-17
• 發明（設計）人: 前田進;古澤滿
• 申請（專利權）人: 第一制藥株式會社
• 主分類號: C12N15/00
• 分類號: C12N15/00;//
• 代理公司: 中國專利代理有限公司
• 代理人: 羅宏,劉元金

本發明是關于利用遺傳工程技術生產可用作藥物的物質的方法，特別是關于較之常規方法更為有效地生產這些物質的方法，尤其是涉及利用病毒DNA于體外和體內生產這類物質的方法。另一方面，本發明涉及利用核多角體病毒，于家蠶〔中國桑蠶（Bombyx????mori）〕體內有效地生產各種有用物質的方法。本發明也涉及到用于實施上述方法的載體和重組體病毒DNA，以及以其生產同樣物質的方法。

以前曾報導過許多借助重組DNA技術的優越性，使用載體等在大腸桿菌、枯草桿菌、啤酒酵母等微生物體內生產有用物質的方法。

有一篇報導述及試圖利用一種其結構基因被替換后的病毒DNA（Autographa????californica核多角體病毒DNA），在培養的細胞（一種建立的Spodoptera????frugiperda細胞系）內生產β-干擾素和β-半乳糖苷酶〔Molecular????and????Cellular????Biology，3（12），2156-2165（1983）;ibid.，4（3），399-406（1984）〕。但問題在于用來完成該方法的A.Californica病毒是可在外界生存的有害毒株。因此以所說的方法來生產有用物質是不能令人滿足的。本發明人進行了一些試圖提供一種更好方法的研究，以生產有用物質現已完成了本發明。

本發明提供一種利用中國家蠶核多角體病毒（以下縮寫為BmNPV）的DNA，以遺傳工程技術生產如蛋白質或糖蛋白等有用物質的方法，特別是提供一種利用所說的BmNPV????DNA中啟動子區域的功能優點與有用物質之基因重組而得到的重組體DNA、以及用于這種重組的重組載體，以有效地生產有用物質的方法。本發明還提供一種利用與BmNPV重組轉移載體結合方式影響轉染的方法，該重組的轉移載體含有一個原來存在于多面體蛋白質結構基因之上游，且仍包括所說結構基因之啟動子區域的5′上游BmNPV????DNA片段、一個翻譯起始密碼子以及一個產生有用物的基因，帶有或不帶有原先存在于所說的多角體蛋白結構基因下游的3′下游BmNPV????DNA片段。本發明進一步提供一種生產有用物質的方法，其包括用重組轉移載體和BmNPV????DNA的混合物接種培養的細胞或活的家蠶體以便形成重組體BmNPV，從而在所說的細胞或活體內產生所說的重組BmNPV，或者以同樣方法用重組BmNPV接種培養的細胞或活的家蠶-該重組BmNPV是通過由BmNPV????DNA和大腸桿菌質粒如PBR322制備一個連接的DNA，再用其它的適當方法進一步用生產有用物質的基因取代多面體蛋白結構基因而構建的，并在所說的細胞或活體內增殖所說的重組體BmNPV。本發明的一個特殊方面是，其所提供的制造有用物質的方法包括在培養的細胞或宿主（特別是由中國家蠶得到的細胞系或恬的家蠶體）內增殖重組的中國家蠶核多角體病毒（BmNPV），該重組體是通過重組含有原先存在于多角體蛋白結構基因上游且仍包括所說的結構基因啟動子區域、一個翻譯起始密碼子和產生有用物質的基因的5′上游BmNPV????DNA片段而產生的，其帶有或沒有原先存在于所說的多角體蛋白結構基因下游的3′下游BmNPV????DNA片段。另一方面，本發明提供了一種載體，其含有最初存在于所說的多角體蛋白結構基因上游且仍包括所說的結構基因之啟動子的5′上游BmNPV????DNA片段，以及一個最初存在于所說之結構基因下游的3′下游BmNPV????DNA片段，另外，剛剛提到的這種載體中的5′上游DNA片段是跟在翻譯起始密碼子和產生有用物質的基因之后的。再一個方面，本發明提供一種生產有用物質的方法，其包括由BmNPV????DNA上切去多角體蛋白結構基因，連同有自所說的結構基因的且包括所說的結構基因的啟動子區域的5′上游部分，以及自所說的結構基因下游的3′下游部分，用產生有用物質的基因去置換所得到的DNA片段的結構基因部分，將置換產物插入載體中，將如此產生的與BmNPV????DNA與BmNPV????DNA聯合轉移到細胞或宿主中，以便轉染并增殖所得到的重組BmNPV????DNA;經與產生有用物質的基因重組而產生的重組BmNPV????DNA為異源基因;剛剛提到的這種重組BmNPV????DNA，其重組是通過在多角體蛋白基因區域置換，或在某些其它區域插入而實現的;一種以遺傳工程技術生產有用物質的方法包括利用BmNPV????DNA作載體;而且以遺傳工程技術生產有用物質的一種方法包括利用原來存在于多角體蛋白結構基因之上游并仍包括所說的結構基因之啟動子區域的5′上游BmNPV????DNA部分、以及原來存在于所說的結構基因之下游的3′下游BmNPV????DNA部分。