[其他]免疫測定方法和裝置

無效

• 申請號: 85104030
• 申請日: 1985-05-23
• 公開（公告）號: CN85104030A
• 公開（公告）日: 1986-11-19
• 發明（設計）人: 古納斯·埃德溫·瓦基塞;紐·科爾曼·歐文;菲利普·艾倫·萊文森
• 申請（專利權）人: 海布利德克公司
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;C12Q1/68;//;C12R191);C12R191)
• 代理公司: 中國專利代理有限公司
• 代理人: 李雒英,巫肖南

本發明涉及配體受體免疫測定。特別是涉及免疫測定過程，尤其是涉及應用單克隆抗體的免疫測定過程。另一方面，本發明也涉及為進行這些測定所需的裝置。

近20年來，免疫測定方法已為體外檢測與疾病或臨床有意義的其它物理情況有關的各種各樣抗原提供了敏感的診斷工具。最初這些不同的測定法應用的是結合到固相上的多克隆抗體。在這些測定中，標記抗原的溶液可與待測樣品中的抗原直接地競爭固相抗體或按順序加入抗體中。結合到固相上標記抗原的程度或在液相中所檢測到的標記抗原的量可用來測定待分析樣品中抗原的存在和其含量。

后來又有了非競爭性免疫測量分析法。在這些測定中同樣亦應用了結合到固相上的多克隆抗體制劑。將懷凝含有抗原的樣品與固相接觸以使該抗原與固相上的抗體結合。典型的步驟是，在孵育后，把樣品從固相分離出來，洗滌固相，然后將固相與另一個已用放射性核素、酶或熒光標記的多隆抗體孵育。

經此第二次孵育后，將未結合的標記抗體與固相分開，在此抗體：抗原：抗體夾心測定法系統中，檢測液相中或結合到固相上的標記抗體的量就可測定試驗樣品中抗原的存在和/或含量。

新近，單克隆抗體的應用已使免疫測定方法有所改良。例如美國4，376，110敘述了應用成對單克隆抗體的兩位點（two-site）免疫測量法。其一結合到固相上，另一被標記以供檢測用。能識別一抗原上不同表位點的單克隆抗體對的應用，使同時進行多個免疫測定分析成為可能，在此分析中抗原和標記抗體的孵育無需先有方法中的多次中間洗滌步驟。

在前述諸方法中，固相抗體一般結合到小珠或小顆粒或被涂敷到一表面上。所有這些方法的特征都是要求固相和標記抗體有一定的孵育期，因此，即使是同時進行多個測定也是耗時的。事實上，完成一次測定通常也需要幾個小時。而且需要堅持耗時的孵育步驟及多次地用測量好的試劑洗滌以致這些方法主要限于在大醫院和咨詢臨床實驗室中應用，因這些地方擁有訓練有素的技術人員和復雜儀器設備可進行這些測定。其結果導致應用相對簡單的，使之可在內科醫生辦公室或甚至以現成出售的供一般家庭保健計劃中使用的以簡單快速的方法進行免疫測定的裝置，這種需求一直得不到滿足。

本發明提供了簡單和迅速的進行配體受體測定的一個方法，應用一簡單設備和不需要長的孵育期階段使用核酸寡聚體雜交的免疫和免疫測量分析法。本發明的裝置的第一部分是多孔板諸如膜或濾器，待檢測靶分析物（配體）的受體結合或固定在此膜或濾器上、或抗受體結合或固定到膜或濾器上，或多孔膜能將待測樣品中的細胞或細胞碎片分離出來，藉此將待檢配體結合到多孔膜上。例如，在免疫和免疫測量分析法中，當配體是一抗原時，則抗體，最好是單克隆抗體，結合到多孔膜上而作為受體。該裝置的第二部分是吸收部件，它具有毛細吸管通道并通過此通道一般以橫向的方式到達其上和下表面。正如此處所用的，術語“毛細吸管”包括一毛細吸管或另外的渠道或通道，它能使液體通過吸收裝置。此第二部分與多孔的第一部分是以毛細吸管相連通的，而且選擇性的使其具有一定的毛細吸管徑大小，雖然當樣品和在該測定中隨后所加的樣品的流體靜壓力不足以引起通過第一部分而流動的情況下，但在不借助于外部裝置仍可以引起液體通過第一部分而流動。第二部分亦可為第一部分起支持作用。

本發明的測定包括下述步驟，即先將液體樣品加到多孔膜上，當液體通過該處而流動時，結合在多孔膜上的受體結合樣品中的可溶性或懸浮的配體，其結合速度明顯較不通過該多孔膜流動時所觀察到的速度要快，或者，假如配體位于細胞的表面，則細胞的物質或被固定到多孔膜上的受體所結合或者當樣品流經它時被其捕獲。在本發明的最好實施例中，加入樣品之后加入另外一個配體的受體溶液，該受體是被標記了的，以使檢測可以進行。例如，在檢測抗原的免疫測量分析中，使用抗體溶液，最好是使用單克隆抗體，它結合在抗原的一個表位上，該表位不干擾結合第一受體。雖然其它的標記物例如放射核素或熒光標記亦可應用，但最好是酶標記。抗體的結合到從樣品中所提取出的抗原上，是通過結合抗體或藉助捕獲細胞物質。標記抗體可立即加入，或短暫孵育后加入使抗原與標記抗體的結合較多，通過洗滌除去非結合的標記抗體，這樣做可增加敏感性。多孔膜上標記抗體的存在經測出即提示樣品中待測靶抗原的存在。在用酶標記的測定中，將可形成顏色反應的底物溶液加到多孔膜上，在溶液通過時，底物即與酶起反應。

圖1是根據本發明進行免疫測定所用裝置的橫切面。

圖2是在本發明中應用的為從待檢樣品中除去抗原的多孔膜的頂視圖。