[其他]魚類細胞光隆培養技術

無效

• 申請號: 85102491
• 申請日: 1985-04-01
• 公開（公告）號: CN85102491A
• 公開（公告）日: 1986-09-24
• 發明（設計）人: 鄧初夏;楊興棋;陳宏溪
• 申請（專利權）人: 中國科學院水生生物研究所
• 主分類號: A01K61/00
• 分類號: A01K61/00
• 代理公司: 中國科學院武漢專利事務所
• 代理人: 劉鑫洲

本發明屬于A01K，魚類、魚類細胞工程。

本發明在國內外尚無先例，至今未有見到魚類細胞的克隆化培養·文件檢索可見：

江藤久美????1978·遺·32（7）：64-71。

本發明的目的在于培養魚類細胞克隆，研究魚類的細胞形態、細胞的生化特性、細胞遺傳、細胞一病毒關系、突變體分離，促進魚類細胞工程和單克隆抗體技術的發展。

魚類細胞克隆培養技術包括三個步驟：

1.制備飼養細胞：取羅非魚的腎組織，經冷消化后，按100萬個細胞/毫升接種，培養原代單層細胞，作飼養細胞用。

2.分離克隆：將待克隆的魚類細胞傳代，挑選形態整齊、色澤明亮、胞質內顆粒少的生長良好的細胞，用細胞顯微操作法將單個細胞移入預先加有0.1毫升飼養細胞（約含1.5-2.0萬個細胞）的96孔微量培養板中，加蓋，透明膠帶密封，27℃孵箱培養。

3.復制培養：當細胞在接種的96孔微量培養板中長至大半孔時，即可消化成細胞懸液后，利用復制培養技術，進行轉移擴增，可獲得大量細胞克隆。

本技術對魚類細胞的克隆率為50%以上，最高能達92%，而用哺乳類細胞克隆方法分離魚類細胞克隆，其克隆率為30%。因此，本技術具有克隆率較高，培養時間較短，不需經X射線處理飼養細胞，使用方便等優點，能在短期內獲得大量細胞克隆。

用細胞顯微操作法分離待克隆的單個細胞，以羅非魚腎培養單層細胞作飼養細胞，與復制培養相結合進行轉移擴增的技術，是實現本專利的最好方式。