[其他]生產(chǎn)干擾素的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 85102303
• 申請日: 1985-04-01
• 公開（公告）號: CN85102303A
• 公開（公告）日: 1986-09-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 北野一昭;藤本茂
• 申請（專利權(quán)）人: 武田藥品工業(yè)株式會社
• 主分類號: A61K45/02
• 分類號: A61K45/02;C12N1/20;//
• 代理公司: 中國專利代理有限公司
• 代理人: 巫肖南,李雒英

本發(fā)明是關(guān)于生產(chǎn)干擾素的一種方法。

干擾素（下面有時(shí)縮寫成“IFN”）是較高級動物細(xì)胞所生成的一種蛋白（朊），該動物細(xì)胞引入病毒、或者與核酸、或者與促進(jìn)細(xì)胞分裂劑一起來制備干擾素。這種干擾素具有抗病毒、抗腫瘤和其他功能。

目前，已知人體IFN有三種不同特性的類型，即α、β和γ型。其中引入病毒的或者同核酸在一起的為α型和β型，引入促進(jìn)細(xì)胞分裂劑的為γ型。因此通過培養(yǎng)人體細(xì)胞或者細(xì)胞系生產(chǎn)了人體干擾素，但生產(chǎn)量非常少，在大量地臨床試驗(yàn)上或做為治療藥劑就不可能提供足夠的人體干擾素。然而，近來基因培養(yǎng)技術(shù)的進(jìn)展，使得α、β和γ型的生物活性蛋白能夠從培養(yǎng)大腸桿菌、或者從一些其它含有一種表示媒介物（下稱媒介物）的微生物來得到，該媒介物具有干擾素插入結(jié)構(gòu)基因。〔Nature，284，316（1980）;Nature，287????411（1980）;Proceedings????of????the????National????Academy????of????Sciences????of????the????United????States????of????America（下面縮寫成Proc.Nat.Acad.Sci.U.S.A），77，5230（1980）;Nucleic????Acids????Research，8????4057（1980）;Nature，295????503（1982）〕。不過，這些方法做為人體干擾素生產(chǎn)的工業(yè)方法，從收率來看并不能令人滿意。

由于這些情況，作者對培養(yǎng)微生物的方法，進(jìn)行了深入的研究，研究培養(yǎng)了載有一個具有干擾素插入結(jié)構(gòu)基因的媒介物的微生物。作者發(fā)現(xiàn)用這種方法所得到的干擾素有非常高的收率。該方法是從常用的介質(zhì)中，選擇一種特殊的化學(xué)規(guī)定介質(zhì)（下簡稱為化學(xué)介質(zhì)）來培養(yǎng)微生物。該介質(zhì)中的有機(jī)氮源多數(shù)是天然產(chǎn)物。這個發(fā)現(xiàn)及進(jìn)一步的研究，使本發(fā)明得以實(shí)現(xiàn)。

于是，本文提出了生產(chǎn)干擾素的一種方法，這種方法包括在含有L-谷氨酸和一個鐵離子源的化學(xué)介質(zhì)中，培養(yǎng)含有一個干擾素插入結(jié)構(gòu)基因的媒介物的微生物，以及從培養(yǎng)基提取干擾素。

人體干擾素已知有α、β和γ三種類型，尤其眾所周知的α型包括許多分子形式，例如對干擾素A、B、C、D、F、H、I和J編碼的基因，已經(jīng)報(bào)道是無性系的，并且以大腸桿菌來表示。（見European????Patent????Application????Publication????No.48970）。γ型干擾素基因（例如，見European????Patent????Application????Publication????No.77670）。也報(bào)導(dǎo)了以大腸桿菌表示。這些基因和其它人體干擾素的基因能以宿主微生物表示，并按照本專利生產(chǎn)干擾素。

有效的干擾素基因以宿主微生物表示，尤其是以大腸桿菌表示，COLEI衍生出PBR322〔Gene，2，95（1977）〕，對于媒介物PBR322常常做為質(zhì)體，任何一個質(zhì)體也可使用，只要它們在大腸桿菌中繁殖生長。這些例子是PBR313〔Gene，2????75（1977）〕，PBR324，PBR325〔Gene，4????121（1978）〕，PBR327，PBR328〔Gene，9，287（1980）〕，PKY2289〔Gene，3，1（1978）〕，PKY2700〔Seikagaku（Biochemistry）52，770（1980）〕，PACYC177，PACYC184〔Journal????of????Bacteriology，134，1411（1978）〕，PRK248，PRK646和PDF41〔Methodsin????Enzymology，68????268（1979）〕。

而且由噬菌體衍生媒介物，如從入噬菌體〔Proc.Nat.Acad.Sci.U.S.A.，71????4579（1974），λgt.λB〔Proc.Nat.Acad.Sci.U.S.A.，72????3416（1975）〕λDam〔Gene，1，255（1977）〕，黃熱病病毒的各種媒介物〔Science，196，161（1977）;Journal????of????Virology，29????555（1979）〕，衍生出λgt系列的λgt.λC。并且也可以使用絲狀的噬菌體衍生出媒介物。