[其他]中國冬蟲夏草真菌及其人工培養方法

無效

• 申請號: 85101971
• 申請日: 1985-04-01
• 公開（公告）號: CN85101971B
• 公開（公告）日: 1988-08-10
• 發明（設計）人: 沈南英;張生民;曾璐;張顯恥;魏世錄
• 申請（專利權）人: 青海省畜牧獸醫科學院
• 主分類號: C12N/14
• 分類號: C12N/14;C12N3/00;//
• 代理公司: 青海省專利服務中心
• 代理人: 楊保華,鄧遠彪

本發明涉及中國冬蟲夏草的人工培養問題。

中國冬蟲夏草（CordycepsSinensis〔Berk〕Sacc），是一種名貴的野生藥用和食用菌類植物。它的純培養真菌從未被真正分離到。本發明得到的這一微生物新種的分生孢子世代分類上屬：半知菌綱（FungiImpergecti）從梗孢目（Moniliales），梗孢科（Monjliacean），頭孢子菌屬（Cephalosporium），定名為“冬蟲夏草頭孢菌”，學名：CephalosporisDongchongxiacaeSp.nev。該菌種現保藏在中國微生物菌種委員會普通微生物中心，保藏號為0020，保藏日期為1985·5·28。

冬蟲夏草屬（Cordyceps）在全世界已發現并鑒定的種有三百多個，對生長在青藏高原的中國冬蟲夏草雖在一百多年前就被命名為C.Sinqnsis（Berk）Sacc，但其真菌因從未被真正分離到，使其分生子世代（無性世代）的分類地位一直沒有得到解決。國內外的許多研究都把分離到的雜菌或冬蟲夏草屬的其它種，誤認為是中國冬蟲夏草真菌。本發明澄清了這一錯誤。

本發明的目的是在獲得真正的中國冬蟲夏草真菌的同時，提出了它的人工培養方法。

其菌種的分離有兩種方法：

一是組織分離法采集未成熟的新鮮冬蟲夏草（最好是子座還未長出地面的），洗凈，用無菌水多次沖洗，放入0.1%升汞溶液中消毒5分鐘，用滅菌蒸餾水洗去升汞，在無菌條件下，切去外皮，避開腸道，切取白凈組織，剪碎，接于分離培養基表面，置于5～20℃溫度條件下培養，此法簡單易行，如材料不理想，培養溫度不適宜或消毒不徹底，容易長出其它共生菌或互生菌。

一種是子囊孢子培養法：將尚未成熟的野生天然蟲草移栽到有保護條件圃中，用消毒紙袋套在它的子座上，使彈出的子囊孢子附著在紙袋上，收取紙袋陰干，放在冰箱中備用。凈化時將附有子囊孢子的紙袋浸于土壤浸出液中，浸透后用小刀將子囊孢子刮下，收集于離心管中，離心分離，棄去上部清液，用土壤浸出液反復洗滌，再用蔗糖溶液洗滌，反復離心分離，收集浮于液面的子囊孢子，再用土壤浸出液洗滌，放入冰箱中備用。萌發時取凈化的子囊孢子少許，放入含慶大霉素的土壤浸出液中，室溫培養三到六天，子囊孢子即可萌發，用滅菌吸管吸取已萌發的子囊孢子稀懸液，滴在瓊脂平板上，在顯微鏡下挑取單個萌發孢子，接種在分離培養基上室溫培養，此法麻煩，初生長緩慢，但可靠性高。

上述兩種方法使用的分離培養基最好的配方是：葡萄糖50克、水解乳蛋白10克、酵母膏1克、硫酸鎂0.5克、磷酸二氫鉀1克、維生素液20毫升（其配方是：鹽酸硫胺100毫克、核黃素25毫克、吡哆醇25毫克、礬酸鈣100毫克、對安基苯甲酸25毫克、氯化膽堿100毫克、肌醇100毫克、煙酰胺100毫克、葉酸2.5毫克、生物素1毫克、蒸餾水500毫升混合而成。）、瓊脂20克、蒸餾水1000毫升，最好再加20%蟲草蝙蝠蛾幼蟲（即蟲草菌寄生體）浸出液（即將切碎干凈的鮮幼蟲1克與5毫升蒸餾水混合，浸泡8～12小時后過濾而成。）。

新鮮組織塊在分離培養基上接種培養一周后，周圍長出細小菌絲，兩個月后形成菌落，三到四個月菌落直徑可達1～2厘米。凈化子囊孢子在分離培養基上接種培養10天后，孢子芽管伸長、分枝，形成菌絲，兩個月菌落直徑2～6毫米，三個月可見很短的灰白色氣中菌絲，四個月菌落直徑達1～2厘米，并有棕黑色色素擴散于培養基中。

將上述兩方法獲得的蟲草真菌，接種于特殊培養基上（編號為S31）培養基配方為：肉水500毫升（即將新鮮牛肉或其它無脂肪肉500克與蒸餾水1000毫升，保持其比例，煮沸1小時后過濾而成。）、水解乳蛋白5克、酵母1克、葡萄糖30克、磷酸二氫鉀1克、硫酸鎂0.2克、瓊脂18克、核酸0.5克、牛奶200毫升、蒸餾水400毫升。5～20℃溫箱中培養一段時間長好后，移入5℃左右冰箱中，四個月后可看到小子座長出，移到室溫下培養一、二個月后小子座可長到2～3厘米，顏色、形態與天然蟲草子座基本一樣。將上述培養出的子座，用黑光燈照射，彈射出的子囊孢子的形態，大小與天然蟲草的子囊孢子完全一樣。

還可采用液體發酵方法加快菌絲的培養，其液體培養基有蠶蛹培養基（蠶蛹粉、葡萄糖、蛋白胨、硫酸鎂、磷酸二氫鉀和水）;肝湯培養基（肝湯、洋芋湯、葡萄糖、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、復合維生素B和水）等，獲得的人工蟲草菌絲經藥理藥化對比試驗和天然蟲草基本一樣。