[其他]用嗜熱放線菌生產固定化葡萄糖異構酶的方法及其用于高果糖糖漿的生產方法

無效

• 申請號: 85100412
• 申請日: 1985-06-25
• 公開（公告）號: CN85100412B
• 公開（公告）日: 1988-02-10
• 發明（設計）人: 賀家明;袁建國
• 申請（專利權）人: 山東省食品發酵工業研究所
• 主分類號: C12N9/92
• 分類號: C12N9/92;C12P19/02;//
• 代理公司: 山東省專利服務處
• 代理人: 徐槐

本發明是關于葡萄糖異構酶的生產方法，特別是關于固定化葡萄糖異構酶的生產方法及其用于生產高果糖糖漿（即果萄糖漿）的方法。

目前國際工業上使用的嗜熱放線菌基本是生產胞內葡萄糖異構酶類型。例如《特許公報》昭49-42555及昭50-17560介紹了一種用嗜熱放線菌（嗜熱鏈霉菌）Streptomyces，YT-NO，6生產固定化葡萄糖異構酶的方法，是先將從發酵液中分離、收集到的菌體進行自溶處理，得到酶液，再使酶掛到載體上進行異構化。該方法由于產生的酶多是胞內酶，因此需要一套破壞細胞壁釋出酶的工藝及設備，所以上述方法存在工藝較復雜、設備較多的問題。

本發明的目的是采用胞外酶型嗜熱放線菌（嗜熱鏈霉菌）StreptomycesM1033（其寄存在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，寄存號為CGMCCN00032）生產葡萄糖異構酶，此酶中胞外酶占總酶量的80%以上，培養液容易過濾，酶蛋白較純（清發酵液經（NH₄）₂SO₄淀沉，透析脫鹽，DEAE-SephadexA₃₀柱和SephadexG₁₅₀柱提純，得均一態葡萄糖異構酶，園盤電泳為一個區帶）。因此可以直接用濾清的發酵液作酶源，將酶吸附在大孔陰離子交換樹脂載體上，制成固定化葡萄糖異構酶，不用再進行胞內酶釋出處理工序，因此簡化了工藝，減少了設備。

首先本發明提供了產生胞外葡萄糖異構酶的嗜熱放線菌（嗜熱鏈霉菌）菌株StreptomycesM1033。該菌株是發明人在1978年從2847份土樣中分離純化得到的原始菌株，再經紫外線誘變，紫外線與亞硝基胍復合誘變，以及不斷純化所得。經生產實踐，國內有關專家鑒定為產胞外葡萄糖異構酶型國產優良菌株。

由于本發明的菌株在葡萄糖天冬素瓊脂上不形成可溶性色素;通氣培養溫度為40-45℃;胞外酶占80%以上，可直接用濾清的發酵液作酶源。因此在主要菌學性質與使用效果上，不同于《特許公報》昭49-42555及昭50-17560的嗜熱鏈霉菌等菌株（這些菌株在葡萄糖天冬瓊脂上生成黃褐色素;通氣培養溫度40-50℃;而且是產胞內葡萄糖異構酶類型）。

本發明的菌株具有以下幾方面特征：

一、所說的菌株的生理特征為：

（1）察氏培養基：生長良好，氣絲乳白色到深灰色，基絲由白到黃褐色，不形成可溶性色素。

（2）淀粉瓊脂：生長良好，氣絲由白色到灰色，基絲由乳白色到淺黃色，不形成可溶性色素。

（3）馬鈴薯浸汁：生長良好，氣絲由白色到灰褐色，基絲由金黃色到淺褐色，不形成可溶性色素。

（4）酪氨酸瓊脂：生長困難，少數菌落氣絲由白色到灰褐色，不形成可溶性色素，酪氨酸酶為陰性。

（5）葡糖天冬素瓊脂：生長良好，氣絲由白色到灰色，基絲由乳白色到淺黃色，不形成可溶性色素。

（6）葡糖蛋白胨瓊脂：生長良好，氣絲由白到淺灰色，基內菌絲由白色到淺褐色，不形成可溶性色素。

（7）明膠培養基：生長一般，液化明膠能力較弱。

（8）牛奶培養基：生長一般，對牛奶的凝固能力較強。

（9）碳源利用：能夠很好的利用淀粉、葡萄糖、果糖、蔗糖、木糖、鼠李糖、甘露醇、肌醇;很難利用棉子糖。

二、所說的菌株的形態特征為：

30-50℃在高氏1號培養基上生長良好，培養3天氣絲由白色到灰色，培養3-5天產生灰色胞子。菌落為園形，似傘狀，表面呈粉狀，胞子絲形狀為：彎曲至形成螺旋。胞子形狀為：園形、橢園形。

本發明進一步提供了StreptomycesM1033斜面、種子、發酵方法、發酵清濾液的分離方法及其葡萄糖異構酶的固定化方法，即說明書附圖前五步工序所采用的條件和方法：

（1）異構酶菌種斜面：即菌株的斜面培養基和斜面培養方法，也就是菌株，首先在淀粉1-3%，硝酸鉀0.05-0.5%，磷酸氫二鉀0.01-0.1%，硫酸鎂0.01-0.1%，氯化鈉0.01-0.1%，硫酸亞鐵0.001-0.005%，瓊脂1.5-2%的斜面培養基上，高溫30℃-50℃培養4～6天。