[發明專利]基于離子交換層析的抗體純化方法

在審

• 申請號: 202310945170.6
• 申請日: 2023-07-31
• 公開（公告）號: CN116655726A
• 公開（公告）日: 2023-08-29
• 發明（設計）人: 孫超;王亞東;韋劍啟;藺智勇;闞子義;羅順
• 申請（專利權）人: 上海澳斯康生物制藥有限公司
• 主分類號: C07K1/18
• 分類號: C07K1/18;C07K16/00
• 代理公司: 華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 向薇

本申請涉及一種基于離子交換層析的抗體純化方法，包括對待純化抗體樣品依次進行上樣至離子交換層析柱、淋洗和洗脫的步驟；其中，所述淋洗包括第一次淋洗、第二次淋洗、第三次淋洗和第四次淋洗，所述第三次淋洗采用的淋洗液包含濃度為1.5mM~3mM的半胱氨酸以及濃度為0.4mM~0.8mM的胱氨酸，pH為7~7.8。上述基于離子交換層析的抗體純化方法，在離子交換層析的基礎上配合采用包含特定濃度的半胱氨酸以及胱氨酸，且pH為7~7.8的淋洗液進行洗脫，能夠在實現抗體純化的同時實現對抗體的修復，使純化后獲得分子結構完整的抗體的含量提升，且蛋白收率高。

技術領域

本申請涉及抗體純化技術領域，特別是涉及一種基于離子交換層析的抗體純化方法。

背景技術

抗體（Antibody）是一種由機體免疫系統針對外源物質（如細菌、病毒的蛋白）所產生的一種球狀蛋白質，因此又被稱為免疫球蛋白（Ig）。近年來，隨著抗體藥物不斷應用于更多治療領域，抗體藥物的結構也變得更為多樣化。特別是，隨著高滴度細胞培養工藝發展，以及雙特異性抗體和三特異性抗體等復雜分子的出現，二硫鍵配對不完全或錯配導致的分子異質性問題屢見不鮮，導致分子結構完整的抗體比例大大降低。

另外，抗體分子通常采用柱層析的方法進行純化，在純化過程中不可避免地造成分子結構完整的抗體的進一步的損失，如此使得抗體的生產成本一直居高不下。有方法通過在柱層析的洗脫階段進行切峰，以去除抗體片段較多的組分提高分子結構完整的抗體比例，但此方法會損失大量蛋白，導致蛋白收率大大降低。

發明內容

基于此，本申請提供一種基于離子交換層析的抗體純化方法。該抗體純化方法能夠在純化的同時提升分子結構完整的抗體的含量，且蛋白收率高。

具體技術方案如下：

一種基于離子交換層析的抗體純化方法，包括對含抗體的樣品依次進行上樣至離子交換層析柱、淋洗和洗脫的步驟；

其中，所述淋洗采用的淋洗液包含濃度為1.5mM~3mM的半胱氨酸以及濃度為0.4mM~0.8mM的胱氨酸，pH為7~7.8；所述淋洗包括如下步驟：

室溫條件下，采用第一淋洗液進行第一次淋洗，所述第一淋洗液包含濃度為45mM~55mM的醋酸-醋酸鈉緩沖液，pH為5~6；

室溫條件下，采用第二淋洗液進行第二次淋洗，所述第二淋洗液包含濃度為15mM~25mM的磷酸鹽緩沖液，pH為7.5~8.5；

35℃~37℃條件下，采用第三淋洗液進行第三次淋洗，所述第三淋洗液包含濃度為1.5mM~3mM的半胱氨酸以及濃度為0.4mM~0.8mM的胱氨酸，pH為7~7.8；所述第三淋洗液的保留時間為5~10分鐘；

室溫條件下，采用第四淋洗液進行第四次淋洗，所述第四淋洗液包含濃度為45mM~55mM的醋酸-醋酸鈉緩沖液，pH為5~6。

在其中一些實施例中，所述第一淋洗液的用量≥3倍柱體積，保留時間≥5分鐘；及/或，

所述第二淋洗液的用量≥3倍柱體積，保留時間≥5分鐘。

在其中一些實施例中，所述第四淋洗液的用量≥3倍柱體積，保留時間≥5分鐘。

在其中一些實施例中，所述離子交換層析柱的填料為POROS?XS樹脂。

在其中一些實施例中，所述上樣的載量為20~40g/L。

在其中一些實施例中，所述洗脫包括采用洗脫液A和洗脫液B進行等度洗脫的步驟；

所述洗脫液A包含濃度為45mM~55mM的醋酸-醋酸鈉緩沖液，pH為5~6；

所述洗脫液B包含濃度為45mM~55mM的醋酸-醋酸鈉緩沖液以及濃度為0.5M~1.5M的NaCl，pH為5~6。

在其中一些實施例中，所述洗脫液A與洗脫液B的體積百分比為40%:60%~60%:40%。