[發明專利]一種低聚半乳糖的液相色譜-質譜聯用檢測方法及其應用

有效

• 申請號: 202310897248.1
• 申請日: 2023-07-21
• 公開（公告）號: CN116626208B
• 公開（公告）日: 2023-10-27
• 發明（設計）人: 余祥英;閆景坤;李琳;彭雪穎;李玉婷
• 申請（專利權）人: 東莞理工學院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/30;G01N30/32;G01N30/34;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 羅新

1.一種低聚半乳糖的液相色譜-質譜聯用檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1、標準品溶液配制：將不同的糖標準品配制成糖標準品儲備液；

S2、將實際樣品進行前處理得到待測液；

S3、液相色譜質譜檢測：將S1的糖標準品儲備液和S2的待測液通過液相色譜質譜進行分離測定；

S4、色譜質譜圖分析：記錄標準品和待測液中各色譜峰的保留時間，以及標準品和待測液中各色譜峰在串聯質譜圖上的特征子離子和母離子強度；計算特征子離子/母離子強度的比值；通過保留時間和色譜峰在串聯質譜圖上的子離子與母離子強度比值來鑒定低聚半乳糖中二糖、三糖和四糖糖苷鍵的α/β構型和/或糖苷鍵的連接位置。

2.根據權利要求1所述的低聚半乳糖的液相色譜-質譜聯用檢測方法，其特征在于，所述標準品儲備液的濃度為0.001~0.1?mg/mL。

3.根據權利要求1所述的低聚半乳糖的液相色譜-質譜聯用檢測方法，其特征在于，所述糖標準品包括曲二糖、異麥芽糖、黑曲霉二糖、蜜二糖、麥芽糖、1,4-半乳二糖、1,6-半乳二糖、乳糖、纖維二糖、槐糖、昆布二糖、龍膽二糖、麥芽三糖、纖維三糖、異麥芽三糖、黑曲霉三糖、昆布三糖、麥芽四糖、纖維四糖、異麥芽四糖、黑曲霉四糖、昆布四糖中的至少一種。

4.根據權利要求1所述的低聚半乳糖的液相色譜-質譜聯用檢測方法，其特征在于，所述液相色譜的條件為：

色譜柱：Infinity?Lab?Poroshell?120?HILIC（3.0?mm×100?mm,?2.7?μm）；柱溫：30~40?℃；進樣量：0.5~2?μL；流速：0.4~0.7?mL/min；

流動相：水（A）-乙腈（B）；梯度洗脫：0~10?min，90%~75%?B；10~10.5?min，75%~90%?B；10.5~15.5?min，90%?B。

5.根據權利要求1所述的低聚半乳糖的液相色譜-質譜聯用檢測方法，其特征在于，所述質譜條件為：電噴霧離子源：正離子，質譜掃描范圍：m/z?50~1000；全掃描模式和母離子（m/z）：[C₁₂H₂₂O₁₁+Na]⁺（m/z?365.1054）、[C₁₈H₃₂O₁₆+Na]⁺（m/z?527.1583）、[C₂₄H₄₂O₂₁+Na]⁺（m/z?689.2111）的串聯質譜掃描。

6.根據權利要求1所述的低聚半乳糖的液相色譜-質譜聯用檢測方法，其特征在于，步驟S4中，所述色譜質譜圖分析包括，記錄標準品和待測液中各色譜峰的保留時間，以及標準品和待測液中各色譜峰在串聯質譜圖上的特征子離子和母離子強度；計算特征子離子/母離子強度的比值；以保留時間為橫坐標，特征子離子/母離子強度的比值為縱坐標對標準品和待測液作圖；以不同結構的標準品和/或不同樣品為橫坐標，特征子離子/母離子強度的比值為縱坐標作圖。