[發(fā)明專利]一種血清外泌體miR-4712-3p作為眼肌型重癥肌無力診斷性生物標(biāo)志物的應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202310742809.0
• 申請日: 2023-06-21
• 公開（公告）號: CN116555418A
• 公開（公告）日: 2023-08-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 周清;馮慧宇;陳劍;黃鑫;王穎薇;穆亞君;楊媛婷;陳嘉欣;李世吟;張日佳
• 申請（專利權(quán)）人: 暨南大學(xué)附屬第一醫(yī)院（廣州華僑醫(yī)院）
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 北京智行陽光知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11738
• 代理人: 周潔

本發(fā)明提供了一種檢測血清外泌體miRNA表達量的試劑在制備診斷眼肌型重癥肌無力的產(chǎn)品中的應(yīng)用，所述血清外泌體miRNA為miR?4712?3p。本發(fā)明通過提取OMG和健康對照組的血清外泌體miRNA并進行深度測序及驗證，結(jié)合生物信息學(xué)分析方法，結(jié)果表明，與健康對照組相比，OMG患者血清外泌體的miR?4712?3p水平顯著下降，在OMG和健康對照組間的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，經(jīng)過驗證具有良好的診斷效能，靈敏度及特異性更高，與由此可見，血清外泌體來源的miR?4712?3p可以作為OMG診斷性生物標(biāo)記物應(yīng)用，以減少OMG的漏診誤診。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種血清外泌體miR-4712-3p作為眼肌型重癥肌無力診斷性生物標(biāo)志物的應(yīng)用。

背景技術(shù)

重癥肌無力(myasthenia?gravis,MG)是一種主要由乙酰膽堿受體抗體介導(dǎo)的、T細(xì)胞依賴、補體和細(xì)胞因子參與，累及到神經(jīng)肌肉接頭的獲得性自身免疫性疾病[1]。MG可累及全身骨骼肌，表現(xiàn)為波動性肌無力[1]。根據(jù)改良Osserman分型，MG可分為眼肌型、全身型、重度激進型、遲發(fā)重度型及肌萎縮型等[1]。當(dāng)肌無力累及到面肌、四肢肌、延髓肌等其他骨骼肌時，稱全身型重癥肌無力(systemic?myasthenia?gravis?GMG)。GMG較眼肌型重癥肌無力(ocular?myasthenia?gravis,OMG)患者更容易出現(xiàn)嚴(yán)重的癥狀，甚至可能發(fā)生呼吸肌無力而危及生命。因此，OMG的早發(fā)現(xiàn)、早診斷和早治療，是延緩甚至防止OMG進展為GMG的關(guān)鍵。

OMG是MG中最常見的一種亞型，僅累及提上瞼肌、眼輪匝肌、眼外肌，占MG的50％[2]。OMG主要表現(xiàn)為波動性的上瞼下垂、復(fù)視/斜視、眼瞼閉合不全。當(dāng)上瞼下垂或斜視癥狀明顯時，處于視力發(fā)育關(guān)鍵期的兒童患者易發(fā)生弱視和立體視覺障礙。OMG受累眼肌無力的程度具有波動性，疲勞后加重，休息、睡眠和低溫后改善。OMG可發(fā)生于所有年齡、種族和民族，但臨床癥狀和對治療的反應(yīng)差異很大。

根據(jù)中國重癥肌無力診斷和治療指南(2022版)，OMG診斷依據(jù)：1)波動性眼肌無力：上瞼下垂、復(fù)視和/或斜視；2)乙酰膽堿受體抗體(acetylcholine?receptorsantibody,AChR-Ab)、肌肉特異性酪氨酸激酶受體抗體(muscle-specific?kinaseantibody,MuSK-Ab)、低密度脂蛋白相關(guān)蛋白4受體抗體(lipoprotein-related?protein4antibody,LRP4-Ab)任一個陽性；3)肌電圖陽性；4)新斯的明試驗陽性；5)治療性藥物試驗陽性。符合上述診斷標(biāo)準(zhǔn)中的第1點以及其他2至5項中任意一點，同時排除其他疾病引起的眼肌麻痹即可明確診斷。

但是，目前臨床上對OMG的診斷存在一定的困難，原因如下：

1)在臨床表現(xiàn)方面，對于神經(jīng)內(nèi)科醫(yī)生和眼科醫(yī)生來說，累及提上瞼肌引起的上瞼下垂癥狀診斷并不困難，但是眼外肌受累出現(xiàn)斜視或復(fù)視時，早期表現(xiàn)較為隱匿，臨床檢查較為專業(yè)，無論對于神經(jīng)科醫(yī)生還是非眼肌專業(yè)的眼科醫(yī)生來講，都具有一定的難度。

2)在新斯的明試驗方面，在新發(fā)病例中敏感性高，但針對病程較長的病例，由于發(fā)病時間較長引起的眼外肌肌肉攣縮，可使眼球固定于某一眼位，導(dǎo)致藥物作用不明顯。

3)現(xiàn)有的抗體檢測，包括AChR-Ab、MuSK-Ab，LRP4-Ab，其中任一抗體陽性即可確診。據(jù)報道AChR-Ab陽性率在GMG中為85％-90％[6]，而在OMG中陽性率僅為50％左右[1]，遠(yuǎn)低于GMG。在AchR-Ab陰性MG患者中，70％的患者存在血清MuSK-Ab陽性，可進一步協(xié)助MG診斷，但MuSK-MG患者主要為累及延髓、頸部、肩部及面部肌肉的GMG，眼部受累較為少見[3，4]。LRP4-Ab在國外MG患者中的陽性率為0.45％～40％[5]，在國人MG患者中陽性率僅0.7％-1.7％[6],遠(yuǎn)低于國外報道，可能與種族差異有關(guān)。