[發明專利]一種低分子量殼寡糖的提取工藝

在審

• 申請號: 202310737905.6
• 申請日: 2023-06-20
• 公開（公告）號: CN116640816A
• 公開（公告）日: 2023-08-25
• 發明（設計）人: 劉振鋒;彭元懷;張世奇
• 申請（專利權）人: 嶺南師范學院
• 主分類號: C12P19/12
• 分類號: C12P19/12;C12P19/00;C12P19/04;C12P19/14;C12R1/685;C12R1/77;C12R1/645;C12R1/01
• 代理公司: 浙江永航聯科專利代理有限公司 33304
• 代理人: 侯蘭玉

1.一種低分子量殼寡糖的提取工藝，其特征在于，具體步驟如下：

(1)先將短柄帚霉-紅球菌發酵物、木瓜蛋白酶、纖維素酶混合制成復合酶，接著將復合酶利用N-琥珀酰殼聚糖為載體，經N,N’-亞甲基雙丙烯酰胺交聯，得到酶制劑；

(2)再將螃蟹殼粉碎成螃蟹殼粉，接著將螃蟹殼粉與玉米漿混合得到混合料，滅菌，向混合料中接入復合菌，在高頻交變磁場條件下發酵，得到發酵產物；

(3)然后將發酵產物進行電解處理，加入步驟(1)所得酶制劑，酶解，滅酶，γ-射線輻照，后處理，即得殼寡糖產品；

其中，所述短柄帚霉-紅球菌發酵物是將短柄帚霉與紅球菌混合發酵而得；所述復合菌是將雅致放射毛霉、藍色犁頭霉、茄病鐮刀菌、黑曲霉按照相等的活菌數混合而得，該復合菌的總活菌數為3～5×10¹⁰cfu/g。

2.根據權利要求1所述的提取工藝，其特征在于，步驟(1)中，短柄帚霉-紅球菌發酵物、木瓜蛋白酶、纖維素酶的質量比為1∶0.5～0.7∶0.2～0.3。

3.根據權利要求1所述的提取工藝，其特征在于，步驟(1)中，所述短柄帚霉-紅球菌發酵物是通過以下方法制備得到的：

(A)發酵培養基的配制：以重量份計，取新鮮未發芽的土豆，去皮，切塊，加入土豆5～6倍重量的水，煮沸30～40分鐘，紗布過濾取濾液，即為土豆汁；然后將3～5份土豆汁、1～2份酵母浸粉、0.8～1份蛋白胨、1～2份3,6-O-羧甲基甲殼素、0.5～0.7份α-五乙酰葡萄糖，0.1～0.2份氯化鈉、0.1～0.2份磷酸氫二鉀、0.1～0.2份磷酸二氫鉀、0.1～0.2份硫酸鎂與100份水混合均勻，滅菌，即得發酵培養基；

(B)將短柄帚霉、紅球菌活化后按照活菌數1∶0.5～0.8混合，按照體積接種量3～4％接入步驟(A)所得發酵培養基中，發酵，離心取上清，濃縮，干燥，即得。

4.根據權利要求1所述的提取工藝，其特征在于，步驟(1)中，以重量份計，所述酶制劑是通過以下方法制備得到的：先將N-琥珀酰殼聚糖溶于水中，得到0.3～0.4g/mL的N-琥珀酰殼聚糖水溶液，將0.2g/mL氯化鈣水溶液與無水乙醇按照體積比1∶1混合均勻得到預混液，再將N-琥珀酰殼聚糖水溶液逐滴滴入等體積的預混液中，攪拌混勻，靜置，凝膠化，過濾得凝膠球；然后將1份凝膠球和3～4份N,N’-亞甲基雙丙烯酰胺超聲分散于12～15份體積濃度20～30％乙醇水溶液中，加熱至回流，保溫攪拌5～6小時，離心取沉淀即為載體；最后將1～2份復合酶和所得載體加入20～22份水中，400～500W超聲波振蕩處理3～4小時，離心取沉淀即得所述的酶制劑。

5.根據權利要求1所述的提取工藝，其特征在于，步驟(2)中，螃蟹殼粉與玉米漿的質量比為1∶1，玉米漿的干物質質量含量為60～70％。

6.根據權利要求1所述的提取工藝，其特征在于，步驟(2)中，復合菌的體積接入量為3～4％。

7.根據權利要求1所述的提取工藝，其特征在于，步驟(2)中，高頻交變磁場條件為：頻率200～300kHz，磁場強度300～400mT；發酵的工藝條件為：pH＝6.5，30～35℃發酵2～3天。

8.根據權利要求1所述的提取工藝，其特征在于，步驟(3)中，電解處理的具體方法為：于硫化鋰為電解質、石墨烯為電極的電解槽中，在pH＝5～6和溫度55～60℃條件下進行電解處理，電解時間30～40分鐘。

9.根據權利要求1所述的提取工藝，其特征在于，步驟(3)中，酶制劑的用量為發酵產物質量的1～2％；酶解的工藝條件為：在pH＝5.0～5.5和溫度40～45℃條件下酶解4～5小時。

10.根據權利要求1所述的提取工藝，其特征在于，步驟(3)中，γ-射線輻照采用⁶⁰Co-γ射線，吸收劑量為3～4kGy。