[發明專利]抗微囊藻毒素LR的單克隆抗體或其抗原結合片段及其應用

有效

• 申請號: 202310714495.3
• 申請日: 2023-06-16
• 公開（公告）號: CN116478284B
• 公開（公告）日: 2023-10-10
• 發明（設計）人: 劉亞茹;李書鵬;王蓓麗;熊靜;郭麗莉;李亞秀;韓亞萌
• 申請（專利權）人: 北京建工環境修復股份有限公司
• 主分類號: C07K16/12
• 分類號: C07K16/12;C12N15/13;G01N33/569;G01N33/577
• 代理公司: 北京三聚陽光知識產權代理有限公司 11250
• 代理人: 張均瑩

本發明屬于生物技術領域，提出了一種抗微囊藻毒素LR的單克隆抗體或其抗原結合片段，單克隆抗體或其抗原結合片段包含輕鏈可變區和重鏈可變區；重鏈可變區包含免疫球蛋白重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2、HCDR3；輕鏈可變區包含免疫球蛋白輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2、LCDR3。將抗MC?LR單克隆抗體用于微囊藻毒素LR的檢測，尤其是食品或水體中微囊藻毒素LR檢測，如基于單克隆抗體能夠建立常用的間接竟爭ELISA檢測方法或膠體金試紙條測定準確度高，具有良好的穩定性，檢測結果準確且檢測成本低，能夠滿足實際市場批量的快速檢測要求，很好地實現對污染水質、污染食源的隨時監控和監測。

技術領域

本發明涉及一種抗微囊藻毒素LR的單克隆抗體或其抗原結合片段及其應用，屬于生物技術領域。

背景技術

微囊藻毒素LR(Microcystin-LR，MC-LR)是分布最廣、危害最大的淡水藍藻毒素之一，因此世界衛生組織（WHO）規定在飲用水標準指導中MC-LR的最低限量為1ng/mL。它屬于具有生物學活性的環狀七肽化合物，主要由淡水藻類銅綠微囊藻(Microcystisaeruginosa)產生，能夠強烈抑制蛋白磷酸酶12A?的活性，擁有很強的致肝癌率，而且100℃的煮沸加熱條件下無法有效破壞其結構，活性炭也不能完全將其吸附，目前MC-LR對水體環境和人群健康的危害已成為全球關注的重大環境問題之一。除了通過飲用水進入人體外，MC-LR還可積累在水生有機體中，據報道，魚、軟體動物和浮游生物都能積累大量微囊藻毒素LR，進而通過食物鏈進入人體。國內外實驗室在對于MC-LR的檢測方面工作已經有了大量的研究，具體檢測方法涵蓋了化學分析法、免疫分析法、蛋白磷酸酶抑制法、細胞毒性法和生物?分析法等。目前現行的MCs國標檢測方法以液相色譜法為主，雖然方法具有較高的選擇性，但存在成本高、樣品取樣量較大、前處理方法復雜等問題。相比之下，免疫分析檢測法具有檢測快速、靈敏度高、易于執行、成本低等技術優勢。目前迫切需要檢測成本低、特異性強、靈敏度高的針對MC-LR的單克隆抗體，并結合常規配套的免疫快速檢測技術，以更大范圍應用于食品安全和水體污染等領域。

目前現有技術中已通過一些篩選方法得到一些微囊藻毒素LR的抗體，但是這些的抗體存在如下缺點：一、抗體性質不均一，在工業上應用較為受限。二、抗體專一性不強，應用于免疫檢測時容易受到微囊藻毒素MC-RR的干擾，檢測靈敏度不夠高。三、穩定性差，在應用時由于其活性條件的限制，工業成本相對較高的。因此，目前仍然迫切需要檢測成本低、特異性強、靈敏度高的針對MC-LR的單克隆抗體，以結合常規配套的免疫快速檢測技術，更大范圍應用于食品安全和水體污染等領域。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供特異性強、靈敏度高且具有更強的廣譜識別能力的抗微囊藻毒素MC-LR單克隆抗體，在此基礎上提供一種用于快速簡便檢測微囊藻毒素的免疫檢測方法，為MC-LR的精確檢測奠定基礎。本發明采用如下的技術方案：

一種抗微囊藻毒素LR的單克隆抗體或其抗原結合片段，所述單克隆抗體或其抗原結合片段包含輕鏈可變區和重鏈可變區；

所述重鏈可變區包含免疫球蛋白重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2、HCDR3；所述HCDR1的氨基酸序列為RYNMS，所述HCDR2的氨基酸序為SINAAPITQWEDSVKN、所述HCDR3的氨基酸序列為SSRLGASEYSFDD；

所述輕鏈可變區包含免疫球蛋白輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2、LCDR3；所述LCDR1的氨基酸序列為GLDNSVSADTMAAMN，所述LCDR2的氨基酸序列為LAQELENAQE、所述LCDR3的氨基酸序列為QLRSPPEHA。

可選地，所述重鏈可變區具有與SEQ?ID?NO:1有至少95％同一性的氨基酸序列；

所述輕鏈可變區具有與SEQ?ID?NO:2有至少95％同一性的氨基酸序列。

可選地，所述重鏈可變區具有如SEQ?ID?NO:?1所示的氨基酸序列；

所述輕鏈可變區具有如SEQ?ID?NO:?2所示的氨基酸序列；