[發明專利]用于檢測結核感染狀態的試劑及其應用

在審

• 申請號: 202310705666.6
• 申請日: 2023-06-15
• 公開（公告）號: CN116466084A
• 公開（公告）日: 2023-07-21
• 發明（設計）人: 張麗帆;劉曉清;張月秋
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院北京協和醫院
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569
• 代理公司: 北京慧尚知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11743
• 代理人: 鄭德龍

本發明涉及生物檢測技術領域，公開了一種用于檢測結核感染狀態的試劑及其應用。通過檢測經抗原CFP?10和/或抗原Rv2028c刺激后細胞因子IFN?γ和/或趨化因子MCP?1的分泌量，實現了對活動性結核病的診斷以及對活動性結核病與結核潛伏感染的鑒別診斷。具有高靈敏度、高特異性、高準確度、高精確度，對于提高治愈率、改善預后、降低傳播風險具有重要的意義。

技術領域

本發明涉及生物檢測技術領域，具體為一種用于檢測結核感染狀態的試劑及其應用。

背景技術

結核潛伏感染者數量龐大，有5%-10%將會發展為活動性結核病（ATB），鑒別診斷ATB和結核潛伏感染（LTBI）對于提高治愈率、改善預后、降低傳播風險具有重要的意義。

目前基于ESAT-6和CFP-10為抗原的γ干擾素釋放試驗?(Interferon?gammarelease?assays,?IGRAs)對結核感染和未感染人群的鑒別具有較高的準確性，其中國際上廣泛應用的有兩種方法：一種是QuantiFERON-TB?Gold?In-Tube?(QFT-GIT)，即采用酶聯免疫吸附試驗?(Enzyme-linked?Immunosorbent?Assay,?ELISA)?檢測全血中致敏T細胞再次受到結核分枝桿菌特異性抗原刺激后釋放的IFN-γ水平。另一種是T-SPOT.TB，即采用酶聯免疫斑點法?(Enzyme-linked?Immunospot?Assay,?ELISPOT)?測定在結核分枝桿菌特異性抗原刺激下，檢測外周血外周血單個核細胞?(Peripheral?Blood?Mononuclear?Cells,PBMC)?中能夠釋放IFN-γ的T細胞數。

世界衛生組織報告顯示，中國肺結核病原學診斷比例約55%。而在綜合醫院診斷的ATB患者中，病原學確診比例不足30%。對于綜合性醫院而言，免疫學檢測手段對結核病的診斷更方便也更快捷，在無法獲得病原學證據時，IGRAs對活動性結核病具有一定的輔助診斷價值和可推廣性。但IGRAs缺點也很明顯：診斷效能不高，不能區分開ATB與LTBI等問題，限制了其在結核高流行地區的應用，因此，亟需尋求更好的生物標志物來輔助診斷ATB以及ATB與LTBI的鑒別診斷。

發明內容

針對現有方法存在的不足，本發明提供了一種用于檢測結核感染狀態的試劑及其應用。該發明通過檢測經抗原CFP-10和/或抗原Rv2028c刺激后細胞因子IFN-γ和/或趨化因子MCP-1的分泌量，可實現對ATB的診斷以及對ATB與LTBI的鑒別診斷。

為了達到上述目的，本發明采用了下列技術方案：

第一方面，本發明提供了一種檢測結核感染狀態的試劑，所述試劑為檢測抗原刺激下細胞因子IFN-γ和趨化因子MCP-1分泌量的試劑，所述檢測結核感染狀態具體為診斷活動性結核病和/或鑒別診斷活動性結核病與結核潛伏感染。

進一步，所述抗原為結核特異性毒力抗原CFP-10和結核潛伏相關抗原Rv2028c。

第二方面，本發明提供了一種檢測結核感染狀態的試劑盒，所述試劑盒包括前文所述的檢測抗原刺激下細胞因子IFN-γ和趨化因子MCP-1分泌量的試劑。

進一步，所述試劑盒還包括前文所述的結核特異性毒力抗原CFP-10和結核潛伏相關抗原Rv2028c。

進一步，所述結核特異性毒力抗原CFP-10為CFP-10肽段庫，含序列如SEQ?IDNO.1-18所示的18條肽段；

所述結核潛伏相關抗原Rv2028c為Rv2028c肽段庫，含序列如SEQ?ID?NO.19-37所示的19條肽段。

進一步，所述檢測結核感染狀態具體為診斷ATB和/或鑒別診斷ATB與LTBI。

第三方面，本發明提供了一種檢測抗原CFP-10和/或抗原Rv2028c刺激下細胞因子IFN-γ和/或趨化因子MCP-1分泌量的方法，包括以下步驟：