[發明專利]一種鼠源性新型位點單克隆抗體阻斷劑及其應用

有效

• 申請號: 202310670930.7
• 申請日: 2023-06-08
• 公開（公告）號: CN116444655B
• 公開（公告）日: 2023-08-25
• 發明（設計）人: 柳靜;詹先發
• 申請（專利權）人: 北京科躍中楷生物技術有限公司
• 主分類號: C07K16/08
• 分類號: C07K16/08;G01N33/577;G01N33/576;G01N33/58
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本發明提供了一種鼠源性新型位點單克隆抗體阻斷劑及其應用。本發明從具有高血清ROS含量的乙肝患者血液中篩選獲得了乙肝病毒新型突變株的HBsAg抗原序列，以突變位點集中區域為目標抗原，將其核苷酸序列導入大腸桿菌表達載體中，制備并獲得目標抗原；利用所述HBsAg抗原免疫動物，獲得相應單克隆抗體，所述抗體能夠高特異性結合目標抗原，并具有良好的熱穩定性；利用所述單克隆抗體，制備相關檢測試劑盒，該試劑盒具有高度的靈敏性和特異性。

技術領域

本發明屬于疾病診斷和檢測領域，具體提供了一種鼠源性新型位點單克隆抗體阻斷劑及其應用。

背景技術

乙型肝炎病毒?(hepatitis?B，HBV)?感染是一個全球公共衛生問題，15-25%?的慢性感染者會因肝硬化、肝細胞癌或肝炎而發展為嚴重疾病并過早死亡。

目前，沒有針對急性乙型肝炎患者的特異性抗病毒治療藥物，大約?95%?的感染免疫功能正常的成年人會自發恢復，護理的主要目標是保持舒適、緩解癥狀并防止患者將感染傳染給他人。對于慢性?HBV?感染者，現在已經提供一些治療藥物和治療方案，如美國食品和藥物管理局已批準治療慢性乙型肝炎干擾素-α（標準和聚乙二醇化）和口服抗病毒藥物（恩替卡韋、替諾福韋、富馬酸二泊西、艾拉酚替諾福韋和非首選的拉米夫定、阿德福韋二吡呋酯和替比夫定）。目前對慢性乙型肝炎的治療可以減緩或預防肝硬化的進展，降低肝癌的發病率，提高長期生存率和生活質量，但不能治愈。因此，大多數開始乙肝治療的患者必須終生服藥，治療的副作用和所需的定期監測增加了患者管理的難度和復雜性。因此，乙型肝炎的防治主要依賴于早期診斷和接種疫苗。

HBV是一種DNA病毒，屬于嗜肝DNA病毒科，它于?1965?年由?Blumberg?博士發現的，Blumberg?博士因此項重大發現而獲得了?1976?年諾貝爾醫學獎。HBV?病毒，最初稱為Dane?顆粒，是一種?42?納米病毒，HBV由核衣殼核心組成，被外脂蛋白外殼（也稱為包膜）包圍。該病毒包含3種主要結構抗原：表面抗原（Hepatitis?B?surface?antigen，HBsAg）、核心抗原（Hepatitis?B?core?antigen?，HBcAg）和e抗原（Hepatitis?B?e?antigen，HBeAg），其中HBsAg?表達量大，在受感染個體的血液中以球形和管狀顆粒（約?22?nm）的形式存在，使得HBsAg成為乙肝檢測試劑和疫苗開發中的重要靶點。

HBV除可導致肝炎和肝硬化之外，還是肝癌的最主要的誘因之一，據統計，全球約50-80%?的肝細胞癌?（hepatocellular?carcinoma，HCC）是由?HBV?感染引起的（參見WildCP,?Montesano?R.?A?model?of?interaction:?aflatoxins?and?hepatitis?viruses?inliver?cancer?aetiology?and?prevention.?Cancer?Lett.?2009;286(1):22–28），在過去的幾十年中，已經證實HBV感染可以通過多種機制促進疾病進展，最終導致肝細胞的惡性轉化，包括HBV基因整合、突變引起的基因組不穩定性、促癌信號通路的激活等，此外表觀遺傳學、外泌體、自噬、代謝調控、免疫抑制等諸多新機制的作用機理也在不斷探索中（參見YuJiang,?Qiuju?Han,Huajun?Zhao,and?Jian?Zhang,The?Mechanisms?of?HBV-InducedHepatocellular?Carcinoma,?J?Hepatocell?Carcinoma.?2021;?8:?435–450.）。在眾多作用機制中，氧化應激在腫瘤的發生和發展中起重要作用，HBV感染患者肝臟和血液中的活性氧（Reactive?oxygen?species，ROS）水平升高，這與疾病的嚴重程度和HBV的復制狀態有關，并且這種活性氧的升高還通常與HBV的基因突變相關，但是目前臨床上卻缺乏對于相關基因突變的有效檢測途徑，不利于臨床診斷和肝臟疾病的治療。