[發明專利]一種通過控制糖多孢紅霉菌胞內NADH水平提高紅霉素產量的誘導表達系統、菌株及應用

在審

• 申請號: 202310670901.0
• 申請日: 2023-06-06
• 公開（公告）號: CN116515879A
• 公開（公告）日: 2023-08-01
• 發明（設計）人: 徐振越;林澤遷;管權;王子儀;張部昌;吳攀攀;吳杭
• 申請（專利權）人: 安徽大學
• 主分類號: C12N15/74
• 分類號: C12N15/74;C12N15/113;C12N15/55;C12N9/04;C12N15/53;C12N1/21;C12N15/90;C12P19/62;C12R1/01
• 代理公司: 合肥興東知識產權代理有限公司 34148
• 代理人: 李靜

1.一種通過控制糖多孢紅霉菌胞內NADH水平提高紅霉素產量的誘導表達系統，其特征在于，包括SACE_1905基因構建的質粒pSETcd-1905-cmt-sgRNA；其中，所述SACE_1905基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

2.根據權利要求1所述的通過控制糖多孢紅霉菌胞內NADH水平提高紅霉素產量的誘導表達系統，其特征在于，所述SACE_1905基因編碼的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。

3.根據權利要求1所述的通過控制糖多孢紅霉菌胞內NADH水平提高紅霉素產量的誘導表達系統，其特征在于，所述質粒pSETcd-1905-cmt-sgRNA的構建方法如下：

①將dCas9片段、合成DNA片段cmt插入到質粒pSET152的酶切位點，獲得重組質粒pSETcd；

②將P_ermE*片段、SACE_1905基因插入到重組質粒pSETcd的酶切位點，獲得重組質粒pSETcd-1905；

③擴增靶向SACE_1905的sgRNA，獲得含sgRNA片段；將所述含sgRNA片段插入到重組質粒pSETcd-1905酶切位點，獲得重組質粒pSETcd-1905-sgRNA；

④擴增cmt元件，并將所述cmt片段插入到重組質粒pSETcd-1905-sgRNA的酶切位點，獲得目標所需的工程質粒pSETcd-1905-cmt-sgRNA。

4.根據權利要求1所述的通過控制糖多孢紅霉菌胞內NADH水平提高紅霉素產量的誘導表達系統，其特征在于，所述質粒pSETcd-1905-cmt-sgRNA用于誘導表達SACE_1905基因，并通過動態控制糖多孢紅霉菌胞內還原力水平來提高紅霉素產量。

5.一種紅霉素高產工程菌株，其特征在于，所述菌株包括如權利要求1～4所述的誘導表達系統。

6.根據權利要求5所述的紅霉素高產工程菌株，其特征在于，將所述誘導表達系統的質粒pSETcd-1905-cmt-sgRNA導入到紅霉素工業菌株中，即得。

7.一種如權利要求5所述的紅霉素高產工程菌株的應用，其特征在于，利用所述紅霉素高產工程菌株發酵生產紅霉素，并以添加誘導劑、優化誘導條件的方式動態控制基因SACE_1905的表達，平衡菌株的初級代謝生長與次級代謝，提高紅霉素產量。

8.根據權利要求7所述的紅霉素高產工程菌株的應用，其特征在于，所述誘導劑采用cumate；誘導條件為：在發酵96h時，添加終濃度為60μmol/L的cumate溶液。