[發明專利]一種用于蕓薹屬植物B基因組染色體特異識別檢測的探針及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202310596407.4
• 申請日: 2023-05-25
• 公開（公告）號: CN116411128A
• 公開（公告）日: 2023-07-11
• 發明（設計）人: 李占杰;秦源;梁啟富
• 申請（專利權）人: 福建農林大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11;C12Q1/6841;G01N33/68
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 林文弘;蔡學俊

1.一種用于蕓薹屬植物B基因組染色體特異識別檢測的探針，其特征在于：所述探針具有如SEQ?ID?NO.1或SEQ?ID?NO.2所示的核苷酸序列。

2.根據權利要求1所述的用于蕓薹屬植物B基因組染色體特異識別檢測的探針，其特征在于：所述探針為地高辛標記探針。

3.根據權利要求2所述的用于蕓薹屬植物B基因組染色體特異識別檢測的探針，其特征在于：所述探針的制備方法為：依據SEQ?ID?NO.1或SEQ?ID?NO.2所示的核苷酸序列設計PCR擴增引物，以黑芥基因組DNA為模板，利用所設計的引物進行PCR擴增，PCR產物經純化后采用缺口平移法進行地高辛標記，得到地高辛標記探針，即為用于蕓薹屬植物B基因組染色體特異識別檢測的探針。

4.根據權利要求3所述的用于蕓薹屬植物B基因組染色體特異識別檢測的探針，其特征在于：擴增SEQ?ID?NO.1所示黑芥著絲粒特異序列的引物為5’-GCCTACTGAGCCTTCCTCCT-3’和5’-GCCATGTCTCAACAGAAGCA-3’，擴增SEQ?ID?NO.2所示黑芥著絲粒特異序列的引物為5’-GCTCTCCATTACCCCTCCTC-3’和5’-AGATTTTGCCCATGCTGTTC-3’。

5.根據權利要求3所述的用于蕓薹屬植物B基因組染色體特異識別檢測的探針，其特征在于：所述缺口平移法的反應體系為：1μg純化PCR產物，50mM?pH7.5?Tris-HCl，50mMMgCl₂，0.05mM?dATP，0.05mM?dCTP，0.05mM?dGTP，0.05mM?dTTP，0.05mM?Dig-dUTP，0.1U/μlDNA聚合酶I，0.005U/μl脫氧核糖核酸酶I。

6.根據權利要求5所述的用于蕓薹屬植物B基因組染色體特異識別檢測的探針，其特征在于：所述缺口平移法的反應條件為：15℃反應1.5h后，加入1μl?0.5M?pH8.0?EDTA或于65℃溫浴10min以終止反應。

7.如權利要求3所述的探針在蕓薹屬植物染色體工程和遠源雜交育種中的應用。

8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于：所述蕓薹屬植物為黑芥。