[發明專利]一種吉氏巴貝斯蟲特異性診斷抗原及其應用

在審

• 申請號: 202310534726.2
• 申請日: 2023-05-12
• 公開（公告）號: CN116425850A
• 公開（公告）日: 2023-07-14
• 發明（設計）人: 劉晶;陳慧嫻;劉群;韋欣欣;馮子軒;王麗芳
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C07K14/44
• 分類號: C07K14/44;C12N15/30;G01N33/569;G01N33/68;G01N33/58;C07K16/20
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 張立娜

本發明公開了一種吉氏巴貝斯蟲特異性診斷抗原及其應用。本發明所提供的吉氏巴貝斯蟲特異性診斷抗原為氨基酸序列如SEQ?ID?No.1所示的蛋白質。本發明利用其作為包被抗原建立了間接ELISA檢測方法，操作簡單、快速高效，特異性好、敏感性高，重復性好，可用于檢測犬吉氏巴貝斯蟲感染情況，可檢出血涂片與PCR無法檢出的陽性樣本，對于犬巴貝斯蟲病的診斷以及防治具有重要意義。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種吉氏巴貝斯蟲特異性診斷抗原及其應用。

背景技術

犬巴貝斯蟲病是一種經硬蜱傳播，由梨形蟲目(Piroplasmida)、巴貝斯科(Babesiida)、巴貝斯屬(Babesia)原蟲寄生于犬的紅細胞所引起的血液寄生蟲病，是寵物臨床上重要的疾病之一。巴貝斯蟲可通過機械作用、引起宿主對寄生蟲血癥的強免疫應答從而破壞紅細胞，使發病犬出現貧血、溶血、血小板減少、全身性炎癥反應綜合征等癥狀，并伴隨有死亡風險。我國流行的蟲種主要是吉氏巴貝斯蟲(B.gibsoni)。

對犬巴貝斯蟲病的診斷方法包括病原學、血清學和分子生物學等。病原學診斷包括血涂片染色檢查、動物接種等。分子生物學診斷方法如聚合酶鏈式反應(PCR)、環介導等溫擴增(LAMP)技術。血清學診斷方法主要有間接熒光抗體試驗(IFAT)和酶聯免疫吸附試驗(ELISA)等。

目前臨床上對犬巴貝斯蟲病的診斷以血涂片檢查蟲體為主，少數條件較好的醫院具備PCR診斷的設備條件。血涂片檢查技術雖然成熟、成本低廉、操作簡單，但該方法對檢驗者的技術要求高，存在較高漏診率，在早期感染和慢性感染階段寄生蟲血癥低的時候難以檢出，且難以應用于隱性感染、無癥狀攜帶犬和循環衰竭患犬。分子生物學技術的局限性在于篩查潛在攜帶者和其他無癥狀犬可能會出現假陰性結果，再加上其步驟繁瑣、使用的試劑及儀器價格昂貴，難以普及到不同規模的寵物醫院，或被應用于大規模篩查。實驗室檢查中IFAT是檢測巴貝斯蟲抗體的金標準，但容易出現交叉反應，且由于巴貝斯蟲的體外培養難度較高，難以普及于臨床診斷。間接ELISA是一種常被用于流行病學調查的血清學診斷方法，具有敏感性高、特異性好、便捷等特點，可用于染蟲率較低的帶蟲免疫犬的檢出和疫區流行病學的調查。

綜上所述，建立一種具備高特異性、高靈敏度的間接ELISA方法對于我國犬巴貝斯蟲病的診斷與篩查具有重要的意義。

發明內容

本發明要求保護一種吉氏巴貝斯蟲特異性診斷抗原及其應用。

第一方面，本發明要求保護一種蛋白質。

本發明所要求保護的蛋白質可作為吉氏巴貝斯蟲特異性診斷抗原，為吉氏巴貝斯蟲BgSBP3蛋白的截短體，具體可為如下任一：

(A1)氨基酸序列為SEQ?ID?No.1的蛋白質；

(A2)將SEQ?ID?No.1所示的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白質；

(A3)與(A1)-(A2)中任一所限定的氨基酸序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性且具有相同功能的蛋白質；

(A4)在(A1)-(A3)中任一所限定的蛋白質的N端和/或C端連接標簽后得到的融合蛋白。

上述蛋白質中，所述標簽是指利用DNA體外重組技術，與目的蛋白一起融合表達的一種多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表達、檢測、示蹤和/或純化。所述蛋白標簽可為His標簽、Flag標簽、MBP標簽、HA標簽、myc標簽、GST標簽和/或SUMO標簽等。