[發明專利]一種橘柄蔓綠絨組織培養方法

在審

• 申請號: 202310534477.7
• 申請日: 2023-05-12
• 公開（公告）號: CN116349604A
• 公開（公告）日: 2023-06-30
• 發明（設計）人: 陸小康;郭梓華;周博;黎東均;蔡桂奇
• 申請（專利權）人: 西昌海越生物科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣州凱東知識產權代理有限公司 44259
• 代理人: 曾志環

1.一種橘柄蔓綠絨的組織培養方法，其特征在于：

包括如下步驟：

(1)獲取并處理外植體；

(2)外植體接種到接種培養基中培養至頂芽萌發并抽長，接種培養基：MS、0.5-1mg/LBA、0-0.01mg/LNAA、30g/L蔗糖、7g/L卡拉膠，pH＝6；

(3)啟動誘導培養，切下頂芽接種到啟動誘導培養基中培養，啟動誘導培養基成分：MS、1.0mg/LBA、0.01mg/LNAA、30g/L蔗糖、7g/L卡拉膠，pH＝6；

(4)將步驟(3)得到的團塊芽切割，接種在增殖培養基中，增殖培養基：MS、0.5-1.0mg/LBA、0.01mg/LNAA、30g/L蔗糖、7g/L卡拉膠，pH＝6；

(5)將步驟(4)獲得的增殖苗進行切割，然后接種到過渡培養基中進行過渡培養，第一次過渡培養的培養基是MS、0.2g/LAC、30g/L蔗糖，6g/L卡拉膠，pH值6.0-6.2；第二次過渡培養的培養基是：MS、0.01mg/LNAA、0.2g/LAC、30g/L蔗糖，6g/L卡拉膠，pH值6.0-6.2，或，MS、0.1mg/LNAA，30g/L蔗糖，6g/L卡拉膠，pH值6.0-6.2，或，MS、0.5mg/LIBA，30g/L蔗糖，6g/L卡拉膠，pH值6.0-6.2。

2.根據權利要求1所述的一種橘柄蔓綠絨的組織培養方法，其特征在于：

所述步驟(5)培養結束后，將所得的過渡苗進行步驟(6)生根培養，其過程是：挑選達成苗標準的過渡苗，接種在生根培養基中，生根培養基：MS、0.01mg/LNAA、0.2g/LAC、30g/L蔗糖，6g/L卡拉膠，pH值6.0-6.2，或，MS、0.1mg/LNAA、30g/L蔗糖，6g/L卡拉膠，pH值6.0-6.2，或，MS、0.1mg/LNAA、0.2mg/LAC、30g/L蔗糖，6g/L卡拉膠，pH值6.0-6.2。

3.根據權利要求2所述的一種橘柄蔓綠絨的組織培養方法，其特征在于：

所述步驟(1)的過程包括：選取生長健壯、無病蟲害、遺傳性狀純正的母株，使植株干爽；將直徑1.5cm，長度3.5cm的頂芽莖段切下，切去氣生根及長葉柄，葉柄保留1.5cm左右長度，獲得外植體；清理外植體表面并沿頂部苞葉的基部環割露出頂芽，然后消毒外植體。

4.根據權利要求3所述的一種橘柄蔓綠絨的組織培養方法，其特征在于：

所述消毒外植體的方法包括：將外植體先后75％酒精消毒30s，0.1％升汞30min，無菌水沖洗；以1-2個芽點為標準進行外植體切割，切分外植體，接觸消毒液的傷口處切下1-2mm厚的部分制造新傷口。

5.根據權利要求1所述的一種橘柄蔓綠絨的組織培養方法，其特征在于：

所述步驟(2)的過程包括：夾住外植體芽點朝上插入到接種培養基中，插入接種培養基深度約3mm，按如下要求進行培養：

培養條件：25℃，光照3000LX，12h光/12h暗；

培養周期：30-50d。

6.根據權利要求1所述的一種橘柄蔓綠絨的組織培養方法，其特征在于：

所述步驟(3)的過程包括：將頂芽從外植體上切下，去掉無用的愈傷組織和黑頭，然后對半切開成兩份，切開后接種至啟動誘導培養基中，按如下要求進行培養：

培養條件：26±1℃，光照3000LX，12h光/12h暗；

轉接周期：60-70天；

若新芽生長情況不佳，可轉接新的啟動誘導培養基繼續誘導培養。

7.根據權利要求5所述的一種橘柄蔓綠絨的組織培養方法，其特征在于：

所述步驟(4)的過程包括：將步驟(3)得到的團塊芽切割，切割要求：去除枯黃葉片及底部淡黃色或褐色愈傷組織，大芽去頂，保留0.8-1cm長度，進行單芽増殖；小芽不去頂，視團塊芽大小切成單芽或2-4個芽團塊，進行團塊增殖，培養要求：

培養條件：25℃，光照3000LX，12h光/12h暗；

轉接周期：35～60天。