[發明專利]一種基于溶脹和層層組裝的“夾心型”交聯聚苯乙烯分析磁珠及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202310534457.X
• 申請日: 2023-05-12
• 公開（公告）號: CN116626289A
• 公開（公告）日: 2023-08-22
• 發明（設計）人: 汪晶;田甜;黃亮
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/544;G01N33/553;G01N33/531;G01N33/68
• 代理公司: 杭州浙科專利事務所(普通合伙) 33213
• 代理人: 龔如朝

本發明公開了一種基于溶脹和層層組裝的“夾心型”交聯聚苯乙烯分析磁珠及其制備方法和應用，磁珠的制備方法為：以羧基化交聯聚苯乙烯微球為模板，將Fesubgt;3/subgt;Osubgt;4/subgt;負載到溶脹的微球模板上形成微球組裝體；然后在含有PEI不良溶劑中，組裝油酸修飾的疏水Fesubgt;3/subgt;Osubgt;4/subgt;；之后進行微球組裝體從有機相到水相的相轉移，接著生長二氧化硅殼層，最后依次經氨基化修飾和羧基化修飾，得到羧基化的“夾心型”交聯聚苯乙烯分析磁珠。本發明以羧基化交聯聚苯乙烯微球為模板，以溶脹法和層層自組裝法負載Fesubgt;3/subgt;Osubgt;4/subgt;粒子，通過微球外包硅實現生物相容性，提供一種尺寸均勻、磁分速度快、沉降時間慢、生物相容性好、檢測性能好的分析磁珠，應用于與ELISA結合的檢測中具有很好的技術效果。

技術領域

本發明涉及一種基于溶脹和層層組裝的“夾心型”交聯聚苯乙烯分析磁珠及其制備方法和應用。

背景技術

PCT(降鈣素原，procalcitonin)是一種蛋白質，當嚴重細菌、真菌、寄生蟲感染以及膿毒癥和多臟器功能衰竭時它在血漿中的水平升高。自身免疫、過敏和病毒感染時PCT不會升高，因此它可以幫助鑒別細菌和病毒感染。PCT在一些非感染類的疾病也可能會升高，比如手術之后、嚴重的創傷、燒傷、重癥胰腺炎、持續性心源性休克等也會升高，這時就需要和細菌感染來鑒別。PCT反映了全身炎癥反應的活躍程度。影響PCT水平的因素包括被感染器官的大小和類型、細菌的種類、炎癥的程度和免疫反應的狀況。

病原微生物仍是細菌感染診斷的金標準，但此方法檢測時間長。臨床懷疑是細菌感染性疾病的患者及時檢測PCT，有助于細菌感染性疾病的早期診斷，并且PCT可指導臨床抗生素的應用。

準確區分低濃度范圍內的PCT水平對指導合理抗生素治療具有重要意義。《降鈣素原PCT急診臨床應用的專家共識》和《下呼吸道感染的國家抗生素指南和降鈣素原抗生素處方指南》指出：當血清中PCT水平低于0.1ng/mL時，強烈不推薦使用抗生素；血清中PCT水平為0.1-0.25ng/mL時，不推薦使用抗生素；血清中PCT水平為0.25-0.5ng/mL時，建議使用抗生素；血清中PCT水平大于0.5ng/mL時，強烈建議使用抗生素。

有關PCT的免疫檢測分析方法有免疫熒光法、免疫化學發光法、酶聯免疫吸附測定(ELISA)。其中免疫熒光法作為一種定量的免疫化學檢測方法，可以針對抗原以及抗體的高特異性，預先在聚酷膜上包被有金標記降鈣素原(PCT)的單克隆抗體和樣本中的降鈣素原結合。而后利用相關的儀器對檢測區域進行掃描，進一步識別發光信號。通過將發光信號強度與PCT進行比較，對PCT標準濃度進行測定，同時制備曲線，進而得到標本的PCT濃度值，該種方法通常較為簡單而且具有一定的高精度特點，同時可重復進行操作，目前被廣泛應用到實驗室操作過程中，但是該種檢測方法具有一定的局限性，主要體現在會出現假陰性或假陽性的結果。免疫化學發光法在進行檢測過程中使用光標記抗體，另一抗體于試管內壁進行固定。該種診斷方法具有一定的特異性，同時又具備一定的高敏感性且操作簡單，測量底線值較低，但發光試劑通常熱穩定性較差，不便于長期保存。酶聯免疫吸附測定是把受檢標本(測定其中的抗體或抗原)和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體結合。加入酶反應的底物后，底物被酶催化變為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據顏色反應的深淺有無進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，故可極大地放大反應效果，從而使測定方法達到很高的敏感度。

免疫磁珠以其便于分離的特點在免疫分析領域中得到了廣泛的應用。與常規檢測模式相比相比，免疫磁珠的使用可實現目標物磁富集以提高信號靈敏度，可將捕獲抗體偶聯在磁珠上，簡化了傳統免疫測定需將抗體偶聯在酶標板或試管中的步驟，同時在復雜溶液中也可實現抗原-抗體特異性結合和復合物的快速分離，減少了測試時間，簡化了分離步驟。