[發明專利]一種維持組織細胞活性的長效保存液及應用

在審

• 申請號: 202310523877.8
• 申請日: 2023-05-11
• 公開（公告）號: CN116508748A
• 公開（公告）日: 2023-08-01
• 發明（設計）人: 肖紅江;解翠薇;王豐;唐為東
• 申請（專利權）人: 杭州濟扶科技有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 杭州大道知識產權代理有限公司 33525
• 代理人: 奚麗萍

本發明公開了一種維持組織細胞活性的長效保存液及應用，包括以下組分：Glutamax培養添加物；青霉素?鏈霉素?兩性霉素B；Primocin；Y?27632；醋酸拉米普肽；2?(4?羥基苯基)甲基?Β?D?葡萄糖苷；山奈酚?4'?O?乙酰氧基丙酯；黃精多糖；海藻糖；α?硫辛酸；溶劑為Hibernate?A培養液；保存液的pH在環境CO2濃度下仍可維持穩定，對組織保存液所盛容器敞口時間無約束，可適應取樣的場景變化；對腫瘤組織有效保存時間達到72小時以上，并能維持細胞活性與增殖能力，可有效應對國內異地醫院樣本的運輸要求。

技術領域

本發明涉及腫瘤類器官培養技術領域，特別涉及一種維持組織細胞活性的長效保存液及應用。

背景技術

類器官可由干細胞、成體干細胞或誘導干細胞經過三維培養分化、發育而成，可高度模擬原位組織的生理結構、功能，可廣泛用于藥物開發、疾病建模等領域。目前腫瘤類器官的構建培養主要基于腫瘤組織的原代培養，而是否能形成腫瘤類器官與腫瘤組織內細胞活性有很強的相關性。但由于腫瘤組織離體后，血液供應中斷，與周圍組織連接中斷，組織內的細胞往往因缺氧、營養缺乏、氧化應激、失巢凋亡甚至細菌大量繁殖而導致細胞活性迅速下降，所以類器官培養通常要求組織離體后4小時內送抵實驗室，而醫院與實驗室通常距離較遠，因此需要一種長效的樣本保存液保存腫瘤樣本的活性。目前通用的類器官培養用組織保存液應用于組織長距離運輸場景時，往往細胞活性低，導致培養獲得的類器官數量少，細胞增殖能力弱，當樣本量受限時難以滿足后續實驗需求。

發明內容

本發明的目的在于提供一種維持組織細胞活性的長效保存液及應用，以克服現有技術中的不足。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

本申請公開了一種維持組織細胞活性的長效保存液，包括以下組分：Glutamax培養添加物；青霉素-鏈霉素-兩性霉素B；Primocin；Y-27632；醋酸拉米普肽；2-(4-羥基苯基)甲基-Β-D-葡萄糖苷；山奈酚-4'-O-乙酰氧基丙酯；黃精多糖；海藻糖；α-硫辛酸；溶劑為Hibernate-A培養液。

作為優選，各組分的含量如下：0.5～2x的Glutamax培養添加物；0.5～3x的青霉素-鏈霉素-兩性霉素B；0.5～3x的Primocin；5～20μM的Y-27632；20～100μM的醋酸拉米普肽；10～20μM的2-(4-羥基苯基)甲基-Β-D-葡萄糖苷；10～30μM的山奈酚-4'-O-乙酰氧基丙酯；10～30mM的黃精多糖；20～80mM的海藻糖；0.1～0.4mM的α-硫辛酸。

作為優選，所述保存液在溫度2～8℃下，對腫瘤組織的有效保存時間大于等于72小時。

作為優選，所述保存液在空氣CO₂濃度下維持pH在7.1～7.5之間的時間大于等于48小時。

本發明還公開了一種維持組織細胞活性的長效保存液的應用，腫瘤組織離體后，浸入所述保存液中，置于溫度2～8℃下保存。

本發明的有益效果：

1、使用方法簡便，適用于手術室、內鏡室等臨床場景。

2、保存液的pH在環境CO₂濃度下仍可維持穩定，對組織保存液所盛容器敞口時間無約束，可適應取樣的場景變化。

3、對腫瘤組織有效保存時間達到72小時以上，并能維持細胞活性與增殖能力，可有效應對國內異地醫院樣本的運輸要求。

本發明的特征及優點將通過實施例結合附圖進行詳細說明。

附圖說明

圖1為根據實施例2不同保存液下肺腺癌組織保存96h后單位重量細胞總量柱狀圖；

圖2為根據實施例2不同保存液下肺腺癌組織保存96h后細胞活率柱狀圖；