[發(fā)明專利]一種萃取平菇蛋白的綠色方法

在審

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• 申請日: 2023-05-10
• 公開（公告）號: CN116496342A
• 公開（公告）日: 2023-07-28
• 發(fā)明（設計）人: 王猛;謝慧賢;張英男;楊智淶;胡秋輝;楊文建;馬寧;裴斐;馬高興;蘇安祥
• 申請（專利權）人: 南京財經(jīng)大學
• 主分類號: C07K1/14
• 分類號: C07K1/14
• 代理公司: 南京業(yè)騰知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 32321
• 代理人: 姜貝貝

本發(fā)明公開了一種萃取平菇蛋白的綠色方法，將平菇干燥后粉碎，得到平菇粉，將平菇粉以1：20料液比溶于去離子水中后，調pH10，然后加熱至45?55℃攪拌提取，結束后離心，收集上清液，得到平菇蛋白粗提液，往平菇蛋白粗提液中加入PEG2000、(NHsubgt;4/subgt;)subgt;2/subgt;SOsubgt;4/subgt;和去離子水，混合均勻后得到雙水相萃取體系，靜置分層，得到上相和下相，保留上相，離心，將得到的沉淀水洗后凍干，得到平菇蛋白。與現(xiàn)有方法相比，本發(fā)明方法平菇蛋白分離效率高，所應用的雙水相體系綠色環(huán)保、生物相容性好，能夠保持蛋白生物活性及構型，且成本低、易于工業(yè)化生產，未來將有很大應用前景。

技術領域

本發(fā)明屬于蛋白質提取技術領域，具體涉及一種萃取平菇蛋白的綠色方法。

背景技術

平菇(Pleurotus?ostreatus)隸屬于傘菌目(Agaricales)、側耳科(Pleurotaceae)、側耳屬(Pleurotus)，是我國當前栽培產量最高的四大食用菌品種之一。據(jù)報道，平菇蛋白具免疫調節(jié)、抗腫瘤、抗病毒、抗氧化及抗高膽固醇血癥等潛在功效，在醫(yī)藥領域應用前景大。研究表明，每100g干平菇中蛋白質含量可達19-26g，必需氨基酸含量充足。近年來，食用菌已被認為是一種極具潛力的新型蛋白質來源，因此對于平菇蛋白的提取與研究具有重要的理論和實際意義。

目前最成熟的蛋白質提取方法是堿提酸沉法，此方法操作簡單，成本低，但純度較低，蛋白質在高濃度的酸或堿液中容易產生有害物質及發(fā)生不可逆變性，導致蛋白質營養(yǎng)價值下降。另一方面，目前常見的蛋白質分離純化方法有凝膠色譜及離子色譜法、等電點沉淀法、電泳法及凝膠層析法等。傳統(tǒng)色譜技術分離純化蛋白質效率高、檢測靈敏度高，但步驟過多，操作復雜，耗費試劑，操作成本較高，產品損失較大，不利于工業(yè)大規(guī)模生產。因此，需要尋求一種更經(jīng)濟高效、綠色環(huán)保的蛋白質萃取技術，來獲得高純度高產量且生物活性較高的產品。

隨著綠色化學的發(fā)展，雙水相萃取技術由于其分離條件溫和、易放大、成本低廉和強大的可調節(jié)性在眾多純化技術中脫穎而出。它的優(yōu)勢在于，雙水相體系中含有大量的水，萃取時接近生物物質的生理環(huán)境，因此蛋白質不會失活或變性，尤其適合用于熱敏蛋白，并且能夠同時做到分離、純化兩步驟一步完成。設備要求低，操作簡單易于放大，可實現(xiàn)工業(yè)連續(xù)自動操作。但目前并沒有采用雙水相萃取平菇蛋白方面的報道。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術的不足，提供一種萃取平菇蛋白的綠色方法，即雙水相法。該方法簡化了蛋白萃取過程，蛋白產率高、經(jīng)濟高效、綠色環(huán)保，易于放大操作。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術方案：

一種萃取平菇蛋白的綠色方法，包括如下步驟：

(1)將平菇干燥后粉碎，得到平菇粉，將平菇粉以1：20料液比加入到去離子水中，攪拌溶解后，用氫氧化鈉溶液調pH10，然后加熱至45-55℃，攪拌提取2-4h，結束后離心，收集上清液，得到平菇蛋白粗提液；

(2)往平菇蛋白粗提液中加入PEG2000、(NH₄)₂SO₄和去離子水，混合均勻后得到雙水相萃取體系，靜置分層，得到上相和下相，保留上相；

(3)將上相分離出來后，離心，將得到的沉淀水洗后凍干，得到平菇蛋白。

步驟(2)中，所述雙水相萃取體系中，PEG2000的質量濃度為15％～40％，(NH₄)₂SO₄的質量濃度為20％～25％。

進一步，步驟(1)中，所述離心條件為：3000g，20min。

進一步，步驟(2)中，所述雙水相萃取體系中，平菇蛋白粗提液的質量占15％～27％，更優(yōu)選為26％。