[發明專利]細胞因子白介素21的純化方法及其應用

在審

• 申請號: 202310483288.1
• 申請日: 2023-04-28
• 公開（公告）號: CN116284328A
• 公開（公告）日: 2023-06-23
• 發明（設計）人: 崔志輝;童路;王琨;譚新勇;冷兆武
• 申請（專利權）人: 南京優愛生物科技研發有限公司
• 主分類號: C07K14/54
• 分類號: C07K14/54;C07K1/18;C07K1/34;C07K1/36;C07K1/14;C12N15/70;C12R1/19
• 代理公司: 安徽知問律師事務所 34134
• 代理人: 侯曄

1.一種細胞因子白介素21的純化方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1，獲取含有白介素21的包涵體沉淀；

S2，清洗包涵體沉淀；

S3，溶解包涵體，使用變性液溶解包涵體，離心過濾獲得蛋白樣品；

S4，陽離子柱粗純，通過陽離子柱對S3中獲得的蛋白樣品進行粗純；

S5，復性目的蛋白，使用復性液復性S4中陽離子柱粗純獲得的白介素21；

S6，陽離子柱精純，使用陽離子柱對S5中復性后的白介素21進行精細純化。

2.根據權利要求1所述的一種細胞因子白介素21的純化方法，其特征在于，所述S1中獲取含有白介素21的包涵體包括：將表達白介素21的菌體裂解，離心得到包涵體沉淀。

3.根據權利要求2所述的一種細胞因子白介素21的純化方法，其特征在于，所述表達白介素21的菌體為大腸桿菌，所述大腸桿菌包括外源質粒，所述外源質粒包括編碼白介素21的氨基酸序列的核苷酸序列。

4.根據權利要求1-3任一所述的一種細胞因子白介素21的純化方法，其特征在于，所述S2中清洗包涵體包括：用20～100mM?Tris，500～1000mM?NaCl，0.1％～1％TritonX-100，pH8.0重懸S1中的包涵體沉淀，以清洗包涵體；離心取沉淀，再用20～100mM?Tris，500～1000mM?NaCl，pH?8.0清洗1～3遍；再次離心，獲得清洗后的包涵體沉淀。

5.根據權利要求4所述的一種細胞因子白介素21的純化方法，其特征在于，所述S3中溶解包涵體包括：使用20～100mM?Tris，8M尿素，5～10mM?DTT，pH?8.0的變性液溶解S2中獲得清洗后的包涵體沉淀，經過離心、過濾獲得蛋白樣品。

6.根據權利要求5所述的一種細胞因子白介素21的純化方法，其特征在于，所述S4中陽離子柱粗純包括：純化線性流速為120cm/h，純化的平衡液為20mM?Tris，8M尿素，pH?8.0；平衡10個柱體積后上樣S3中獲得的蛋白樣品，然后用洗雜緩沖液20mM?Tris，8M尿素，150mMNaCl，pH?8.0洗雜10個柱體積；20mM?Tris，8M尿素，500mM?NaCl，pH8.0洗脫目的蛋白，獲得粗純目的蛋白。

7.根據權利要求6所述的一種細胞因子白介素21的純化方法，其特征在于，所述S5中復性目的蛋白包括：用20～100mM?Tris，50～200mM?NaCl，1mM?GSH，0～0.3mM?GSSG，0.5～2mMEDTA，pH?8.0的復性液復性S4中得到的粗純目的蛋白，獲得復性后的目的蛋白樣品。

8.根據權利要求7所述的一種細胞因子白介素21的純化方法，其特征在于，所述S5中復性目的蛋白包括：通過稀釋或濃縮的方式將粗純目的蛋白濃度調整至1～2mg/ml，復性液體積是粗純目的蛋白溶液體積的9～15倍，不停攪拌復性液的同時將粗純目的蛋白溶液緩慢滴入復性液中。

9.根據權利要求8所述的一種細胞因子白介素21的純化方法，其特征在于，所述S6中陽離子柱精純包括：純化線性流速為120cm/h，純化的平衡液為20mM?Tris，pH?8.0，平衡10個柱體積，然后上樣S5中得到的蛋白樣品，上樣結束后用洗雜緩沖液20mM?Tris，400mM?NaCl，pH?9.0洗雜10個柱體積，20mM?Tris，400～800mM?NaCl，pH?9.0洗脫目的蛋白，得到精純目的蛋白。

10.根據權利要求9所述的一種細胞因子白介素21的純化方法，其特征在于，所述陽離子柱的純化層析填料為POROS?50HS、CPX、GE-SP、TA-SP、50SP-HP或HC60-SP。

11.權利要求1-10中任意一種所述的細胞因子白介素21的純化方法在制備細胞因子白介素21中的應用。

12.一種細胞因子白介素21的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

M1，構建表達白介素21的大腸桿菌，具體包括：將編碼白介素21的核苷酸序列克隆至質粒pET28a；將重組質粒pET28a-IL-21轉化至大腸菌株BL21(DE3)；

M2，表達白介素21，包括：將M1中的大腸桿菌在37℃振蕩培養，當菌液吸光度達到0.8～1.0時，用終濃度為0.5～1mM的IPTG誘導大腸桿菌BL21(DE3)的表達白介素21；

M3，純化白介素21，具體包括：權利要求1-10中任意一種所述的細胞因子白介素21的純化方法。