[發明專利]一種梨bZIP類轉錄因子PubZIP914及其應用

在審

• 申請號: 202310479342.5
• 申請日: 2023-04-28
• 公開（公告）號: CN116554291A
• 公開（公告）日: 2023-08-08
• 發明（設計）人: 張紹鈴;陳楊楊;殷豪;吳瀟;王肖華
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: C07K14/415
• 分類號: C07K14/415;C12N15/29;C12N15/84;C12N15/11;A01H5/08;A01H6/74;A01H6/82
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 吳爽;徐冬濤

本發明公開了一種梨bZIP類轉錄因子PubZIP914及其應用，屬于植物分子基因工程技術領域，本發明從梨中分離得到編碼PubZIP914轉錄因子的完整cDNA，連接到植物過表達載體上，利用農桿菌介導轉化植物，通過煙草瞬時表達證明PubZIP914定位于植物細胞核內；利用農桿菌注射獲得瞬時轉化梨果實，分別利用葉盤轉化法和組織侵染法獲得轉基因番茄和轉基因梨愈傷，結果表明過表達PubZIP914能夠提高植物中揮發性脂肪酸衍生物的合成。本發明為bZIP轉錄因子促進植物揮發性脂肪酸衍生物合成的研究提供了研究基礎和基因資源。

技術領域

本發明屬于植物分子基因工程技術領域，具體涉及一種梨bZIP類轉錄因子PubZIP914及其應用。

背景技術

梨(薔薇科梨屬)是溫帶地區最重要的水果作物之一，具有很高的經濟價值，目前在50多個國家均有種植。國內種植較為廣泛的亞洲梨品種可分為四種：白梨(P.bretschneideri?Rehd.)、秋子梨(P.ussuriensis?Max.)、砂梨(P.pyrifolia?Nakai.)和新疆梨(P.sinkiangensis?Yu.)。大多數亞洲梨果實的果肉偏脆，汁水清甜，香氣偏淡。然而秋子梨中的‘南果’梨，果實經后熟會釋放出非常濃郁的果香和酒香，因其香味宜人，口感特別而受到廣泛關注，是我國主要栽培的秋子梨品種之一?！瞎娉墒旃麑嵵械闹饕銡獬煞质羌核嵋阴?，乙酸乙酯和乙酸己酯。然而市場上最為流行的梨品種主要是白梨、砂梨和新疆梨，揮發性化合物種類較少且濃度較低。

香氣濃郁的梨果實更容易吸引消費者前來購買，南果梨是香氣機理研究的良好材料。因此，利用基因工程技術針對揮發性化合物的關鍵調控因子進行遺傳改良，對于改善淡香梨品種的香氣含量具有重要意義。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明的目的在于一種梨bZIP類轉錄因子PubZIP914及其應用。

本發明解決其技術問題采用的技術方案是：

第一方面，本發明保護一種梨bZIP類轉錄因子PubZIP914，其選自如下a)、b)或c)：

a)其核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示；

b)SEQ?ID?NO.1所示的核苷酸序列經取代、缺失和/或增加一個或幾個核苷酸；

c)在嚴格條件下與1)限定的DNA序列雜交的核苷酸序列。

第二方面，本發明保護前文所述的轉錄因子PubZIP914基因編碼的蛋白。

在具體的實施方案中，所述蛋白選自如下A)或B)：

A)如SEQ?ID?NO.2所示的氨基酸序列；

B)SEQ?ID?NO.2所示的氨基酸序列經取代、缺失和/或增加一個或多個氨基酸且具有相同活性的由1)衍生的蛋白。

第三方面，本發明保護擴增前文所述的轉錄因子PubZIP914基因全長或任一片段的引物對。

在具體的實施方案中，所述引物對包括引物對A和/或引物對B，其中引物對A如SEQID?No.3～4所示；引物對B如SEQ?ID?No.5～6所示。

第四方面，本發明還保護含有前文所述的轉錄因子PubZIP914基因的重組表達載體、表達盒、轉基因細胞系、或基因工程菌。

在具體的實施方案中，本發明提供兩種重組表達載體的構建方法：

方法一：將前文所述的基因PubZIP914插入到pCAMBIA1301的XbaI和BamHI位點之間得到重組表達載體35S-PubZIP914-GFP。

方法二：將前文所述的基因PubZIP914插入到PSAK277的HindⅢ和XbaⅠ位點之間得到重組表達載體PSAK277-PubZIP914。