[發明專利]豬繁殖與呼吸綜合征ELISA抗體檢測試劑盒

在審

• 申請號: 202310446645.7
• 申請日: 2023-04-24
• 公開（公告）號: CN116482356A
• 公開（公告）日: 2023-07-25
• 發明（設計）人: 張蕾;董春娜;李鵬宇;李靜;馬良;肖進;齊鵬
• 申請（專利權）人: 中牧實業股份有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/68;G01N33/543
• 代理公司: 北京惟誠致遠知識產權代理事務所(普通合伙) 11536
• 代理人: 王慧鳳

本發明公開了一種豬繁殖與呼吸綜合征ELISA抗體檢測試劑盒及其應用。該試劑盒包括酶標板、陽性對照血清、陰性對照血清、酶標二抗、樣品稀釋液、20倍濃縮洗滌液、底物液A、底物液B、終止液，其中，所述酶標板包被有豬繁殖與呼吸綜合征抗原表位多肽組合物。該抗原表位多肽組合物為序列表中序列1所示的多肽、序列表中序列2、序列表中序列3所示的多肽中的一種或兩種以上的任意組合。本試劑盒使用化學合成抗原肽包被酶標板，抗原用量少、靈敏性和特異性高，可以高效地檢測是否有豬繁殖與呼吸綜合征抗體。本發明試劑盒敏感性高、特異性好、且操作便捷，具有良好的市場前景。

技術領域

本發明屬于生物檢測技術領域，更具體地，本發明涉及一種豬繁殖與呼吸綜合征ELISA抗體檢測試劑盒。

背景技術

豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine?reproductive?and?respiratory?syndrome,PRRS)的病原體是豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine?reproductive?and?respiratorysyndrome?virus,PRRSV)，該病主要引起種豬的繁殖障礙及仔豬嚴重的呼吸道疾病，是一種高度傳染的病毒性傳染病，在我國俗稱“豬藍耳病”。病毒感染后，繁殖母豬主要表現為厭食、發熱、流產、弱仔、木乃伊胎等繁殖障礙，感染仔豬主要表現為體溫升高、出現呼吸系統疾病、高發病率和高死亡率。公豬感染后可導致食欲下降、精神沉郁、精液質量下降，育肥豬感染后發病多數較溫和。

豬繁殖與呼吸綜合征嚴重影響全球養豬業，1996年我國首次報道并分離了豬繁殖與呼吸綜合征病毒，2006年夏季，暴發了由高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒(HP-PRRSV)引起的流行，給我國養殖也帶來了巨大損失。目前我國豬繁殖與呼吸綜合征流行情況非常復雜，仍是嚴重危害我國養殖業的重要免疫抑制性疾病，為了更好地對我國的豬繁殖與呼吸綜合征疫情進行防控，進行相關診斷技術的研究非常重要。

PRRSV屬于于動脈炎病毒科(Arteriviridae)的動脈炎病毒屬(Arterivirus)，是一種有囊膜的單股正鏈RNA病毒。PRRSV基因型存在廣泛變異，目前主要分為兩種基因型：PRRSV-1(歐洲基因)和PRRSV-2(北美基因型)。PRRSV基因組全長約為15kb，5’有帽子結構、3’有polyA尾，除去非編碼區(UTR)，包含至少10個ORF，編碼16種非結構蛋白和7種結構蛋白，分別表達核蛋白(Nucleocapsid,N)、膜基質蛋白(Membrane,M)、囊膜蛋白(Glycoprotein,GP2～GP5)和非糖基化囊膜E蛋白(Envelop?protein,E)。研究顯示，N蛋白和GP5蛋白為主要結構蛋白，尤其是N蛋白是PRRSV中豐度最高的蛋白，含有4～5個重要的抗原結構域，富含能夠被免疫系統識別的表位，常作為病毒特異性抗體檢測和疾病診斷的靶標。GP5為糖基化的囊膜蛋白，是病毒囊膜的主要部分，GP5蛋白含有多個抗原表位，其中既有線性表位，也有構象表位，在胞外區還有中和表位，同時參與病毒對宿主細胞的吸附以及侵入過程。GP5蛋白作為PRRSV的主要結構蛋白，在致病和免疫過程中都發揮著重要作用。

目前，PRRSV的血清學檢測技術主要包括病毒中和試驗別(Virus?neutralizationtest,VNT)、免疫過氧化物酶單層試驗(immunoperoxidase?monolayer?assay,IPMA)、間接免疫熒光抗體試驗(indirect?immunofluorescent?antibody?test,IFA))和酶聯免疫吸附試驗(enzymelinked?immunosorbent?assay,ELISA)等，其中ELISA被廣泛應用于檢測PRRSV抗體。

發明內容

本發明的目的在于提供一種用于檢測豬繁殖與呼吸綜合征抗體的間接ELISA檢測試劑盒，該試劑盒利用豬繁殖與呼吸綜合征N蛋白和GP5蛋白抗原表位多肽作為包被抗原，建立了一種特異性、敏感性和重復性好的間接ELISA方法，用于檢測豬血清中是否含有豬繁殖與呼吸綜合征特異性抗體。