[發(fā)明專利]一種用于檢測鼻咽癌的試劑盒

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202310433286.1
• 申請日: 2023-04-13
• 公開（公告）號: CN116359506A
• 公開（公告）日: 2023-06-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 顏克亮;寧志偉;夏俊強(qiáng)
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳市巨東生物醫(yī)學(xué)工程有限公司
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/543;G01N33/544;G01N33/577
• 代理公司: 廣州三環(huán)專利商標(biāo)代理有限公司 44202
• 代理人: 黃綺穎

本發(fā)明提供一種用于檢測鼻咽癌的試劑盒。該試劑盒包括固相載體和包被于固相載體的表面的捕獲抗原，捕獲抗原為分別針對LF2?IgG、BGLF2?IgG的特異性抗原。本發(fā)明提供的試劑盒能夠?qū)崿F(xiàn)對鼻咽癌進(jìn)行高靈敏度、高特異性檢測，其陽性預(yù)測值高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于檢測鼻咽癌的試劑盒。

背景技術(shù)

鼻咽癌是指發(fā)生于鼻咽腔頂部和側(cè)壁的惡性腫瘤，是我國南方地區(qū)高發(fā)惡性腫瘤之一，其發(fā)病率為耳鼻咽喉惡性腫瘤之首。鼻咽癌患者在臨床早期階段無明顯癥狀，容易延誤診斷和治療。

EB病毒(Epstein-Barr?virus，EBV)感染是鼻咽癌最主要的致病因素之一，幾乎100％的非角化性鼻咽癌均具有EBV感染。鼻咽癌患者外周血中常存在多種抗原的高滴度的抗EBV特異性抗體，并且這些抗體抗原的出現(xiàn)往往在臨床腫瘤發(fā)生之前。

目前，臨床上主要以EBV?EBNA1-IgA和VCA-IgA作為鼻咽癌早期篩查和診斷指標(biāo)，但其存在著較為明顯的缺陷，如靈敏度不高、特異性差、陽性預(yù)測值低。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供一種用于檢測鼻咽癌的試劑盒或方法，以實(shí)現(xiàn)對鼻咽癌進(jìn)行高靈敏度、高特異性檢測，其陽性預(yù)測值高，并且其操作簡單、自動化程度高。

根據(jù)本發(fā)明的第一個(gè)方面，提供一種用于檢測鼻咽癌的試劑盒，該試劑盒包括固相載體和包被于固相載體的表面的捕獲抗原，捕獲抗原為分別針對LF2-IgG、BGLF2-IgG的特異性抗原。

本發(fā)明提供的用于檢測鼻咽癌的試劑盒以LF2-IgG和BGLF2-IgG作為鼻咽癌的篩查和診斷指標(biāo)，能夠很好地區(qū)分正常人群和鼻咽癌人群，且其診斷鼻咽癌效果優(yōu)于傳統(tǒng)鼻咽癌血清學(xué)指標(biāo)VCA-IgA、EBNA1-IgA，能夠?qū)Ρ茄拾┻M(jìn)行有效檢測，其檢測靈敏度、特異性和陽性預(yù)測值高。本發(fā)明提供的鼻咽癌化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒可以與全自動免疫檢測儀聯(lián)用，操作步驟極大簡化，加大了檢測速度和檢測通量，提高了檢測效率，同時(shí)避免了人為操作導(dǎo)致的誤差。本發(fā)明提供的試劑盒能夠?qū)崿F(xiàn)對鼻咽癌的快速診斷，為鼻咽癌的預(yù)防和治療提供可靠的數(shù)據(jù)支持，促進(jìn)鼻咽癌的早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷，有利于提高鼻咽癌的臨床治療效果。

優(yōu)選地，捕獲抗原為分別針對EBNA1-IgA、VCA-IgA、LF2-IgG、BGLF2-IgG的特異性抗原。

本方案以EBNA1-IgA、VCA-IgA、LF2-IgG、BGLF2-IgG這四種抗體水平作為鼻咽癌的篩查和診斷指標(biāo)，其診斷效能優(yōu)于單個(gè)指標(biāo)、兩個(gè)指標(biāo)以及三個(gè)指標(biāo)的診斷效能，可以顯著提高鼻咽癌診斷的準(zhǔn)確性。

優(yōu)選地，捕獲抗原由以下步驟制備得到：對LF2-His、BGLF2-His基因序列進(jìn)行合成，分別將合成的基因序列克隆進(jìn)原核表達(dá)載體中，然后將原核表達(dá)載體轉(zhuǎn)入大腸桿菌中，利用0.5mM?IPTG誘導(dǎo)大腸桿菌進(jìn)行表達(dá)，收集蛋白，得到捕獲抗原。

優(yōu)選地，固相載體為磁珠。

優(yōu)選地，固相載體為表面包被有羧基的磁珠。

與普通的氨基化固相載體相比，采用的固相載體為表面經(jīng)過羧基化處理的磁珠，且具有比表面積大的特點(diǎn)，捕獲抗原在固相載體的表面上固定更加牢固，有利于進(jìn)一步提高鼻咽癌檢測的準(zhǔn)確性。

優(yōu)選地，捕獲抗原通過以下方式包被于固相載體的表面：利用偶聯(lián)緩沖液對捕獲抗原進(jìn)行稀釋，向其中加入固相載體，混勻；偶聯(lián)緩沖液的pH值為4.7；偶聯(lián)緩沖液包括以下組分：0.1M?MES，0.9％?NaCl，1mg/mL?EDC。

本方案采用含有MES、NaCl和EDC的偶聯(lián)緩沖液將捕獲抗原固定在固相載體的表面上，使得捕獲抗原能夠牢固結(jié)合在固相載體的表面上，不易脫落，有利于血清樣本中的抗體與捕獲抗原的牢固結(jié)合，進(jìn)而提高鼻咽癌檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。