[發明專利]一種自分泌IL-21的NKL-IL21細胞系及其構建方法和應用在審
| 申請號： | 202310421034.7 | 申請日： | 2023-04-14 |
| 公開（公告）號： | CN116590343A | 公開（公告）日： | 2023-08-15 |
| 發明（設計）人： | 張建;張海榮;韓秋菊;趙華俊 | 申請（專利權）人： | 山東大學 |
| 主分類號： | C12N15/867 | 分類號： | C12N15/867;C12N15/24;C12N5/10;A61K35/17;A61K38/20;A61P35/00 |
| 代理公司： | 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221 | 代理人： | 王志坤 |
| 地址： | 250012 山*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 分泌 il 21 nkl il21 細胞系 及其 構建 方法 應用 | ||
1.一種自分泌IL-21的NKL-IL21細胞系的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：
S1、使用內切酶酶切核酸序列如SEQ?ID?NO.1所示的hIL-21基因片段和慢病毒載體，通過連接酶將酶切后的hIL-21基因和慢病毒載體連接，獲得目的質粒；
S2、使用磷酸鈣轉染法將目的質粒與包裝質粒轉染至細胞中，培養后收取病毒液并濃縮純化；
S3、使用濃縮純化后的病毒液感染NKL細胞，將感染的NKL細胞進行擴增、流式細胞術分選，得到NKL-IL21細胞系。
2.如權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述hIL-21基因片段的獲取方法包括以下步驟：
分離獲取人外周血單個核細胞，并提取RNA逆轉錄為cDNA，cDNA作為PCR模板擴增出hIL-21基因片段。
3.如權利要求2所述的構建方法，其特征在于，PCR上游引物的核酸序列如SEQ?ID?NO.2所示，，PCR下游引物的核酸序列如SEQ?ID?NO.3所示。
4.如權利要求1所述的構建方法，其特征在于，步驟S1中，所述慢病毒載體包括pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP，所述內切酶包括BamHⅠ和NheⅠ。
5.如權利要求1所述的構建方法，其特征在于，步驟S1中，所述連接酶包括T4連接酶。
6.如權利要求1所述的構建方法，其特征在于，步驟S2中，所述包裝質粒包括pMDLg/RRE、pRSV-Rev和p-VSV-G中的一種或多種。
7.如權利要求1所述的構建方法，其特征在于，步驟S2中，培養時間為36-60小時。
8.如權利要求1所述的構建方法，其特征在于，步驟S2中，使用PEG8000進行濃縮純化。
9.一種自分泌IL-21的NKL-IL21細胞系，其特征在于，通過權利要求1-8任一項所述的構建方法獲得。
10.權利要求9所述的NKL-IL21細胞系在制備抗腫瘤產品中的應用。
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