[發明專利]一種油污土壤修復復合菌劑及其應用

在審

• 申請號: 202310407232.8
• 申請日: 2023-04-12
• 公開（公告）號: CN116396907A
• 公開（公告）日: 2023-07-07
• 發明（設計）人: 馬娜娜;楊傳倫;車樹剛;王建平;馮清敏;王秀芝;陳振發;冉新新;孫琪
• 申請（專利權）人: 黃河三角洲京博化工研究院有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;B09C1/10;C12R1/125;C12R1/38
• 代理公司: 山東祺智知識產權代理有限公司 37361
• 代理人: 趙斌

1.一種復合菌種，其特征在于，包括保藏編號為CGMCC?NO.16154的枯草芽孢桿菌、CGMCC?NO.16167的枯草芽孢桿菌和CGMCC?NO.24318的施氏假單胞菌。

2.根據權利要求1所述的復合菌種，其特征在于，所述兩株枯草芽孢桿菌和施氏假單胞菌的有效菌數量之比為(0.8-1):(0.8-1):(0.8-1)。

3.一種復合菌劑，其特征在于，其原料包括權利要求1或2所述的復合菌種。

4.根據權利要求2所述的復合菌劑，其特征在于，其包括權利要求1或2所述的復合菌種的活菌、或其培養物、提取物中的至少一種。

5.權利要求2或3所述的微生物菌劑的制備方法，其特征在于，所述微生物菌劑為液體菌劑，其制備方法如下：

分別將CGMCC?NO.16154和CGMCC?NO.16167的枯草芽孢桿菌、CGMCC?NO.24318的施氏假單胞菌活化、制備種子液，然后分別接種于發酵培養基中發酵，收集發酵液，完成液體菌劑的制備。

6.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述活化為室溫條件下活化4h-9h；

種子液的制備過程為：將活化后的菌種接種至LB液體培養基中，針對不同菌種的種子液制備過程如下：

CGMCC?NO.16154枯草芽孢桿菌于溫度為28-32℃，搖床轉速為180-200r/min，振蕩培養10-15h獲得種子液；

CGMCC?NO.16167枯草芽孢桿菌于溫度為30-32℃，搖床轉速為180-200r/min的條件下，振蕩培養15-18h獲得種子液；

CGMCC?NO.24318施氏假單胞菌于溫度為25-30℃，搖床轉速為160-200r/min的條件下，振蕩培養9-12h獲得種子液。

7.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述發酵過程為：將所述菌種的種子液按體積百分比1-5％的接種量分別接種于發酵培養基中進行高密度發酵；所述高密度發酵的條件為：罐壓0.02-0.05MPa，溫度為28-38℃，轉速為200-400r/min，溶解氧≥20％。

8.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，按重量百分比計，所述保藏編號為CGMCC?NO.16154的枯草芽孢桿菌發酵培養基包括：葡萄糖1-3％、玉米粉0.5-2％、豆粕3-5％、尿素0.1-0.3％、硫酸錳0.01-0.03％、硫酸鎂0.04-0.06％、氯化鈉0.02-0.04％、硫酸亞鐵0.004-0.005％、氯化鈣0.01-0.03％，聚醚消泡劑0.1％，余量為水，發酵時間為20-25h；

所述保藏編號為CGMCC?NO.16167的枯草芽孢桿菌發酵培養基包括：豆粕2-3％、玉米漿干粉1.5-2.5％、玉米粉2-3％、蔗糖1-3％、硫酸銨0.1-0.15％、碳酸鈣0.1-0.3％、磷酸氫二鉀0.2-0.3％、硫酸錳0.01-0.03％、硫酸鎂0.05-0.15％、硫酸亞鐵0.002-0.004％，聚醚消泡劑0.1％，余量為水，發酵時間為22-28h；

所述保藏編號為CGMCC?NO.24318的施氏假單胞菌發酵培養基包括：葡萄糖1.2％-1.8％、玉米漿干粉0.85％-1％、豆粕3％-4％、硫酸銨0.01％-0.02％、硫酸鎂0.03％-0.05％、氯化鈉0.01％-0.03％、硫酸亞鐵0.002-0.005％、氯化鈣0.01％-0.02％，聚醚消泡劑0.1％，余量為水，發酵時間為10-15h。

9.一種油污土壤修復菌劑的處理方法，其特征在于，將權利要求1或2所述的復合菌種、權利要求3或4所述的微生物菌劑或權利要求5-7任一項所述的制備方法制得的微生物菌劑添加到油污土壤中。

10.根據權利要求8所述的處理方法，其特征在于，按照每克土壤中有效活菌菌量≥10⁵cfu的量添加所述復合菌種或所述微生物菌劑。