[發(fā)明專利]一種與甌江彩鯉體表體色相關(guān)的結(jié)構(gòu)變異分子標(biāo)記、特異引物及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202310405980.2
• 申請日: 2023-04-17
• 公開（公告）號: CN116516018A
• 公開（公告）日: 2023-08-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳曉雯;王軍;柯景;王成輝
• 申請（專利權(quán)）人: 上海海洋大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11;C12Q1/6858
• 代理公司: 上海伯瑞杰知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31227
• 代理人: 曹莉

1.一種與甌江彩鯉體表體色相關(guān)的結(jié)構(gòu)變異分子標(biāo)記，其特征在于：所述結(jié)構(gòu)變異分子標(biāo)記是甌江彩鯉Scarb1基因起始密碼子ATG上游652bp處的插入或缺失的355bp的DNA片段，其序列如SEQ?ID?NO:1所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的與甌江彩鯉體表體色相關(guān)的結(jié)構(gòu)變異分子標(biāo)記，其特征在于：白色品系甌江彩鯉表現(xiàn)為所述結(jié)構(gòu)變異分子標(biāo)記的插入，純合紅色品系甌江彩鯉表現(xiàn)為所述結(jié)構(gòu)變異分子標(biāo)記的缺失。

3.權(quán)利要求1所述的結(jié)構(gòu)變異分子標(biāo)記的特異引物，其特征在于：所述特異引物的序列為：

正向引物：5'-GCGCTCCAAAAGAATCCTAAGC-3'；

反向引物：5'-ACGCCTCCTACAGCTAGATAGA-3'。

4.權(quán)利要求1所述的結(jié)構(gòu)變異分子標(biāo)記在鑒定紅色品系甌江彩鯉遺傳純度中的應(yīng)用。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的結(jié)構(gòu)變異分子標(biāo)記的應(yīng)用，其特征在于：應(yīng)用方法包括以下步驟：

(1)收集待測紅色品系甌江彩鯉個體尾鰭樣品，提取基因組DNA；

(2)采用權(quán)利要求3所述的特異引物對基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增；

(3)將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測，并根據(jù)電泳圖譜的電泳條帶大小判定待測樣品為純合型還是雜合型。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的結(jié)構(gòu)變異分子標(biāo)記的應(yīng)用，其特征在于：步驟(2)中，所述PCR擴(kuò)增的反應(yīng)體系為10μL體系，包括：正向引物0.5μL，反向引物0.5μL，2×PCR?Taq?mix?5μL，ddH₂O?3μL，模板DNA?1μL。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的結(jié)構(gòu)變異分子標(biāo)記的應(yīng)用，其特征在于：步驟(2)中，所述PCR擴(kuò)增的反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性5min；95℃變性30s，60℃退火35s，72℃延伸1min20s，35個循環(huán)；72℃終延伸10min，4℃保存。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的結(jié)構(gòu)變異分子標(biāo)記的應(yīng)用，其特征在于：步驟(3)中，所述瓊脂糖凝膠電泳采用1.2％的瓊脂糖凝膠，電泳的時間為30min。

9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的結(jié)構(gòu)變異分子標(biāo)記的應(yīng)用，其特征在于：步驟(3)中，根據(jù)電泳圖譜的條帶大小判定遺傳純度的方法如下：如果只有843bp的電泳條帶，則待測紅色品系甌江彩鯉個體為純合型；如果有843bp和1198bp兩條電泳條帶，則待測紅色甌江彩鯉個體為雜合型；所述843bp的序列如SEQID?NO:4所示，所述1198bp的序列如SEQ?ID?NO:5所示。