[發(fā)明專利]一種靶向調(diào)控GTF2IRD1基因表達(dá)的miR-novel-1007及其應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202310402527.6
• 申請(qǐng)日: 2023-04-14
• 公開（公告）號(hào): CN116355906A
• 公開（公告）日: 2023-06-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 儲(chǔ)明星;劉玉芳;李文韜;劉子嶷;王鵬
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所
• 主分類號(hào): C12N15/113
• 分類號(hào): C12N15/113;C12N15/11;C12Q1/686;C12Q1/6888
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所 11569
• 代理人: 吳波

本發(fā)明提供了一種靶向調(diào)控GTF2IRD1基因表達(dá)的miR?novel?1007及其應(yīng)用，屬于干擾RNA技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明提供的靶向調(diào)控GTF2IRD1基因表達(dá)的miR?novel?1007的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:1所示。miR?novel?1007是通過結(jié)合GTF2IRD1基因的3'UTR區(qū)域來實(shí)現(xiàn)GTF2IRD1基因表達(dá)的負(fù)調(diào)控作用。由于過表達(dá)GTF2IRD1基因能有效提高羊的繁殖力，而miR?novel?1007能夠降低羊的繁殖力，因此，所述miR?novel?1007作為檢測(cè)標(biāo)志物在羊育種中的應(yīng)用，同時(shí)還提供所述miR?novel?1007的抑制劑在提高羊繁殖力中的應(yīng)用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于干擾RNA技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種靶向調(diào)控GTF2IRD1基因表達(dá)的miR-novel-1007及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

MicroRNAs(miRNAs)是非編碼RNA的子集，是長(zhǎng)度約22個(gè)核苷酸的內(nèi)源啟動(dòng)的短RNA分子，被認(rèn)為具有轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)靶mRNAs的功能。長(zhǎng)期以來，由于技術(shù)和方法學(xué)的限制，miRNAs的意義一直被忽視，直到最初發(fā)現(xiàn)兩個(gè)miRNAs(Lin-4和let-7)，通過與目標(biāo)mRNAs的3'UTR不完全堿基配對(duì)來抑制其翻譯，進(jìn)而控制線蟲的發(fā)育時(shí)間。miRNAs不僅在細(xì)胞生長(zhǎng)周期、細(xì)胞分化、增殖和凋亡中起調(diào)控作用，而且在腫瘤發(fā)生和宿主-病原體相互作用中也有調(diào)節(jié)作用。MiRNAs通過堿基配對(duì)與完全或接近完全互補(bǔ)的mRNAs?3'UTR區(qū)的序列基序控制目標(biāo)表達(dá)。3'UTR區(qū)中某些富含AU的元件被發(fā)現(xiàn)與miRNAs相互作用，并直接或間接地作為有效的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控信號(hào)。對(duì)miRNA靶點(diǎn)的分析表明，3'UTR較長(zhǎng)的基因通常具有較高的miRNA結(jié)合位點(diǎn)密度，主要參與發(fā)育調(diào)控；而3’UTR較短的基因通常具有較低的miRNA結(jié)合位點(diǎn)密度，并傾向于參與基本的細(xì)胞過程。這些結(jié)果驗(yàn)證了3'UTR在與miRNAs相互作用中的重要性。也有研究者報(bào)道，來自動(dòng)植物的一部分miRNAs是通過結(jié)合mRNAs的5'UTR來發(fā)揮作用。因此，許多miRNAs可能在5'UTR和3'UTR區(qū)域含有重要的與miRNA相互作用的位點(diǎn)。3'UTR是miRNAs的一個(gè)重要但不是唯一的結(jié)合靶標(biāo)，這一事實(shí)為miRNAs留下了一種可能性，即miRNAs通過多種途徑或模式識(shí)別它們的靶標(biāo)。

目前，現(xiàn)有技術(shù)中有關(guān)于miRNAs在調(diào)節(jié)動(dòng)物生殖方面的報(bào)道，例如公開號(hào)為CN109136388A的專利公開了一種半滑舌鰨差異表達(dá)的microRNA標(biāo)簽，以解決半滑舌鰨雄魚及偽雄魚在生殖遺傳差異的區(qū)分問題。然而，在山羊中是否有靶向作用繁殖力相關(guān)的基因的miRNAs還未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種靶向調(diào)控GTF2IRD1基因表達(dá)的miR-novel-1007，所述miR-novel-1007通過與靶基因GTF2IRD1的3'UTR區(qū)域的結(jié)合位點(diǎn)，實(shí)現(xiàn)調(diào)控GTF2IRD1基因表達(dá)水平。

本發(fā)明提供了一種靶向調(diào)控GTF2IRD1基因表達(dá)的miR-novel-1007，核苷酸序列如SEQ?ID?NO:1所示。

本發(fā)明提供了一種所述miR-novel-1007的檢測(cè)方法，包括以下步驟：

將用引物對(duì)對(duì)樣本進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到PCR產(chǎn)物進(jìn)行分析，得到279bp的DNA片段則判斷樣本中含有miR-novel-1007；

所述引物對(duì)包括核苷酸序列如SEQ?ID?NO:2所示的正向引物和核苷酸序列如SEQID?NO:3所示的反向引物。

優(yōu)選的，所述PCR擴(kuò)增的反應(yīng)程序?yàn)?5℃預(yù)變性5min；95℃變性30s，60℃變性30s，72℃延伸30s，40個(gè)循環(huán)；72℃延伸7min。

優(yōu)選的，所述PCR產(chǎn)物的分析方法采用瓊脂糖凝膠電泳完成。

本發(fā)明提供了一種所述miR-novel-1007的激動(dòng)劑，包括核苷酸序列如SEQ?ID?NO:2所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ?ID?NO:3所示的反向引物。