[發明專利]耐熱纖連蛋白及其制備方法用途、核酸、表達載體及菌株

在審

• 申請號: 202310400422.7
• 申請日: 2023-04-14
• 公開（公告）號: CN116640204A
• 公開（公告）日: 2023-08-25
• 發明（設計）人: 張翼飛;胡巧霞;李居易;趙裕棟;崔俊鋒
• 申請（專利權）人: 深圳柏垠生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/78
• 分類號: C07K14/78;C12N15/12;C12N15/70;C12N1/21;C12N5/071;A61K8/64;A61K47/42;C12R1/19
• 代理公司: 深圳市恒程創新知識產權代理有限公司 44542
• 代理人: 劉冰

本發明公開一種耐熱纖連蛋白及其制備方法用途、核酸、表達載體及菌株，其中，該耐熱纖連蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.6所述的氨基酸序列。本發明技術方案通過基因工程的方法，利用定向進化，得到一種耐熱纖連蛋白，該耐熱纖連蛋白熱穩定性高，且不改變耐熱纖連蛋白生物活性，顯著提高耐熱纖連蛋白在化妝品原料等領域中的應用前景。

技術領域

本發明涉及基因工程技術領域，特別涉及耐熱纖連蛋白及其制備方法用途、核酸、表達載體及菌株。

背景技術

纖連蛋白（fibronectin，Fn）是一種存在于細胞外基質和基底膜中的主要非膠原性糖蛋白，參與調節細胞極性、分化和生長，在細胞黏附中起關鍵作用。纖連蛋白參與人體許多關鍵的生命活動：1）參與細胞的遷移、黏附、增殖、止血和組織修復，以及胚胎發育，可促進細胞及膠原蛋白有序增殖；2）促進成纖維細胞分泌蛋白酶，分解蛋白雜質；3）誘導表皮下基底膜的再建及正常角化過程，加速細胞及組織在結構及功能上的全面性修復。因此，纖連蛋白已被廣泛使用于化妝品護膚成分、醫用傷口敷料、體內治療等領域，具有極高的生物學和醫學應用價值。

天然纖連蛋白是一種二聚體糖蛋白，每個單體分子量為230-250?kDa，具有可變的分子構象和剪接變體。纖連蛋白包含不同的功能性區域，可與整合素、肝素、膠原蛋白、DNA等結合，發揮重要的生理功能。盡管纖連蛋白具有促進傷口修復、促進細胞黏附等多重生物學活性，但是其較低的熱穩定性，極大地限制了其在化妝品和體外醫療器械等領域的應用。野生型纖連蛋白極易在化妝品乳化過程中發生蛋白質變性，從而失去了其生物活性和應用價值。

發明內容

本發明的主要目的是提供一種耐熱纖連蛋白及其制備方法用途、核酸、表達載體及菌株，旨在提高纖連蛋白的熱穩定性。

為達到上述發明目的，采用如下技術方案。

一種耐熱纖連蛋白，包括以下至少一種：

氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示的耐熱纖連蛋白，SEQ?ID?NO.2：

PTDLRFTNIGPDTMRVTWAPPPSIDLTNFLVRYSPVKNEEDVAELSISPSDNAVVLTNLLPGTEYVVSVSSVYEQHESTPLRGRQKTGLDSPTGIDFSDITANSFTVHWIAPRATITGYRIRHHPEHFSGRPREDRVPHSRNSITLTNLTPGTEYVVSIVALNGREESPLLIGQQSTVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGRGDSPASSKPISINYRTEIDKPSAIPAPTDLKFTQVTPTSLSAQWTPPNVQLTGYRVRVTPKEKTGPMKEINLAPDSSSVVVSGLMVATKYEVSVYALKDTLTSRPAQGVVTTLENVSPPRRARVTDATETTITISWRTKTETITGFQVDAVPANGQTPIQRTIKPDVRSYTITGLQPGTDYKIYLYTLNDNARSSPVVIDASTAIDAPSNLRFLATTPNSLLVSWQPPRARITGYIIKYEKPGSPPREVVPRPRPGVTEATITGLEPGTEYTIYVIALKNNQKSEPLIGRKKTDELPQLVTLPHPNLHGPEILDVPST；

氨基酸序列如SEQ?ID?NO.4所示的耐熱纖連蛋白，SEQ?ID?NO.4：