[發(fā)明專利]煙酰胺單核苷酸腺苷轉(zhuǎn)移酶突變體及其方法和用途

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202310400404.9
• 申請(qǐng)日: 2023-04-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN116334027A
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-06-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李家龍;陳永貴;楊述章;任杰;范謙
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 湖南利爾生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N9/12
• 分類號(hào): C12N9/12;C12N15/54;C12N1/21;C12N15/70;C12P19/36;C12R1/19
• 代理公司: 北京林達(dá)劉知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11277
• 代理人: 李茂家;閆俊萍

1.煙酰胺單核苷酸腺苷轉(zhuǎn)移酶突變體，其中，所述突變體選自如下(i)-(iv)組成的組中的任一項(xiàng)：

(i)所述煙酰胺單核苷酸腺苷轉(zhuǎn)移酶突變體和SEQ?ID?NO:1所示的序列相比，在對(duì)應(yīng)于SEQ?ID?NO:1所示序列的至少第91和127位中的一個(gè)或多個(gè)位置處包含突變；

(ii)與(i)所示序列具有至少98％的序列同一性，且不包括SEQ?ID?NO:1所示序列的突變體；

(iii)由多核苷酸編碼的煙酰胺單核苷酸腺苷轉(zhuǎn)移酶突變體，所述多核苷酸在非常高嚴(yán)格條件下與(a)或(b)所示的多核苷酸雜交：

(a)編碼如(i)所示氨基酸序列的突變體的多核苷酸；

(b)(a)的全長(zhǎng)互補(bǔ)多核苷酸；

(iv)由(i)、(ii)或(iii)任一項(xiàng)所示的煙酰胺單核苷酸腺苷轉(zhuǎn)移酶突變體的片段，并且，所述片段仍然具有煙酰胺單核苷酸腺苷轉(zhuǎn)移酶活性。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的煙酰胺單核苷酸腺苷轉(zhuǎn)移酶突變體，其中，所述突變體為包含如下(c)或(d)所示的突變的突變體：

(c)對(duì)應(yīng)SEQ?ID?NO:1所示序列的第91位的氨基酸由精氨酸(R)突變?yōu)楦彼?P)；

(d)對(duì)應(yīng)SEQ?ID?NO:1所示序列的第121位的氨基酸由谷氨酸(E)突變?yōu)樘K氨酸(T)；

優(yōu)選地，所述煙酰胺單核苷酸腺苷轉(zhuǎn)移酶突變體包含如SEQ?ID?NO:2或SEQ?ID?NO:3所示的氨基酸序列。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的煙酰胺單核苷酸腺苷轉(zhuǎn)移酶突變體，其中，所述煙酰胺單核苷酸腺苷轉(zhuǎn)移酶突變體包括在(i)所示序列的突變體的N端或C端部位缺失或添加至少一個(gè)氨基酸殘基。

4.一種重組多肽，其中，所述重組多肽包括權(quán)利要求1～3任一項(xiàng)所述的煙酰胺單核苷酸腺苷轉(zhuǎn)移酶突變體。

5.一種分離的多核苷酸，其包含編碼如權(quán)利要求1～3任一項(xiàng)所述的煙酰胺單核苷酸腺苷轉(zhuǎn)移酶突變體的核苷酸序列，或包含編碼權(quán)利要求3所述的重組多肽的核苷酸序列。

6.一種核酸構(gòu)建體，其中，所述核酸構(gòu)建體包含權(quán)利要求5所述的分離的多核苷酸，所述多核苷酸與一個(gè)或多個(gè)調(diào)控序列可操作地連接，所述調(diào)控序列為包含啟動(dòng)子和/或核糖體結(jié)合位點(diǎn)的核苷酸序列，并且所述調(diào)控序列指導(dǎo)所述煙酰胺單核苷酸腺苷轉(zhuǎn)移酶突變體的基因在宿主細(xì)胞中表達(dá)并合成突變體酶。

7.一種重組表達(dá)載體，其中，所述重組表達(dá)載體包含權(quán)利要求5所述的多核苷酸，或權(quán)利要求6所述的核酸構(gòu)建體。

8.一種重組宿主細(xì)胞或重組基因工程菌，其中，所述重組宿主細(xì)胞或重組基因工程菌包含權(quán)利要求1～3任一項(xiàng)所述的煙酰胺單核苷酸腺苷轉(zhuǎn)移酶突變體、權(quán)利要求4所述的重組多肽、權(quán)利要求5所述的分離的多核苷酸、權(quán)利要求6所述的核酸構(gòu)建體，或者權(quán)利要求7所述的重組表達(dá)載體。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的重組宿主細(xì)胞或重組基因工程菌，其中，所述重組宿主細(xì)胞或基因工程菌來(lái)源于埃希氏桿菌屬(Escherichia)、歐文氏菌屬(Erwinia)、沙雷氏菌屬(Serratia)、普羅維登斯菌屬(Providencia)、腸道菌屬(Enterobacteria)、沙門氏菌屬(Salmonella)、鏈霉菌屬(Streptomyces)、假單胞菌屬(Pseudomonas)、短桿菌屬(Brevibacterium)或棒狀桿菌屬(Corynebacterium)的微生物；

優(yōu)選地，所述基因工程菌來(lái)源于大腸桿菌(Escherichia?coli)、谷氨酸棒桿菌(Corynebacterium?glutamicum)或枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)；更優(yōu)選地，所述基因工程菌來(lái)源于大腸桿菌(Escherichia?coli)。

10.一種包含根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的重組宿主細(xì)胞或重組基因工程菌的細(xì)胞培養(yǎng)物。