[發(fā)明專利]一種頭孢硫脒及其制劑中的聚合物雜質(zhì)的HPLC檢測方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202310400169.5
• 申請日: 2023-04-14
• 公開（公告）號: CN116539742A
• 公開（公告）日: 2023-08-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉爽;談宗華;劉明莉;唐琴;張薇;郭彬;萬婷婷;鄭流茜;王曉;吳統(tǒng)選
• 申請（專利權(quán)）人: 天圣制藥集團(tuán)重慶藥物研究院有限公司;天圣制藥集團(tuán)股份有限公司;湖北天圣藥業(yè)有限公司;湖南天圣藥業(yè)有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;B01J20/281;G01N30/34;G01N30/54
• 代理公司: 重慶弘旭專利代理有限責(zé)任公司 50209
• 代理人: 張建

本發(fā)明公開了一種頭孢硫脒及其制劑中的聚合物雜質(zhì)的HPLC檢測方法，包括步驟：使用高效液相色譜法（HPLC）對頭孢硫脒及其制劑中的聚合物雜質(zhì)進(jìn)行分離測定，其中聚合物雜質(zhì)為頭孢硫脒與7?ACA、頭孢硫脒β?內(nèi)酰胺環(huán)水解物以及頭孢硫脒β?內(nèi)酰胺環(huán)水解脫羧物形成的二聚體、三聚體和多聚體，該方法以球狀親水硅膠為填充劑，并以緩沖鹽?有機(jī)相溶液作為流動(dòng)相，色譜柱柱溫為30?40℃。該方法具有分離度好、簡單快速、專屬性強(qiáng)、靈敏度高、再現(xiàn)性好，能夠?qū)︻^孢硫脒及其制劑中聚合物雜質(zhì)在更好分離的前提下得到更準(zhǔn)確的含量測定。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及色譜法測試或分析技術(shù)領(lǐng)域，具體來說，涉及頭孢硫脒及其制劑中的聚合物雜質(zhì)的HPLC檢測方法。

背景技術(shù)

頭孢硫脒系第一代頭孢菌素，其對革蘭陽性菌及部分革蘭陰性菌均有抗菌活性，對革蘭陽性球菌的作用尤強(qiáng)。臨床上主要用于敏感菌所引起呼吸系統(tǒng)、肝膽系統(tǒng)、五官、尿路感染及心內(nèi)膜炎、敗血癥。本品通過抑制敏感菌的細(xì)胞壁合成產(chǎn)生作用，主要作用于細(xì)菌的中隔細(xì)胞壁，抑制細(xì)菌粘肽合成第三步，阻止粘肽的交叉聯(lián)結(jié)，使完整的細(xì)胞壁無法形成，而產(chǎn)生殺菌作用；是一種繁殖期殺菌劑。

頭孢硫脒化學(xué)結(jié)構(gòu)如下所示：

中國藥典2020版中對頭孢硫脒鈉鹽的質(zhì)量控制包括酸堿度、澄清度與顏色、有關(guān)物質(zhì)(雜質(zhì)C、雜質(zhì)D峰等)、殘留溶劑、細(xì)菌內(nèi)毒素等。

其中對頭孢硫脒聚合物的有關(guān)物質(zhì)的質(zhì)量控制檢測按照HPLC法(中國藥典通則0512)測定。色譜條件為：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(Kromasil100-5C18，4.6mmx250mm，5μm或效能相當(dāng)?shù)纳V柱)；以磷酸鹽緩沖液(取無水磷酸氫二鈉2.76g，枸櫞酸1.29g，加水溶解并稀釋成1000ml)-乙腈(86:14)為流動(dòng)相；檢測波長為254nm；進(jìn)樣體積10μl。具體測定方法為：精密量取供試品溶液、對照溶液與雜質(zhì)C對照品溶液，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的2.5倍。

質(zhì)量控制限度為：雜質(zhì)C峰面積不得大于對照溶液主峰面積的0.1倍(0.1％)，其他單個(gè)雜質(zhì)峰面積不得大于對照溶液主峰面積的0.5倍(0.5％)，各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積的1.5倍(1.5％)，小于靈敏度溶液主峰面積0.5倍的峰忽略不計(jì)。

抗生素中的高分子雜質(zhì)，統(tǒng)稱為聚合物。大量研究表明引發(fā)頭孢菌素過敏反應(yīng)的過敏原是制劑中高分子聚合物雜質(zhì)，通過控制聚合物雜質(zhì)可控制過敏反應(yīng)的發(fā)生。因此，頭孢硫脒及其制劑中聚合物雜質(zhì)的含量水平的高低直接決定了產(chǎn)品的質(zhì)量及后續(xù)臨床用藥的安全。但是，現(xiàn)行的頭孢硫脒及其制劑的國內(nèi)外現(xiàn)行藥典質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)均未對其聚合物雜質(zhì)進(jìn)行控制，僅對籠統(tǒng)的有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行質(zhì)控，無法具體分離確定聚合物雜質(zhì)的含量。

中國專利申請CN104910186A公開了一種頭孢硫脒水合物晶型。該專利披露該晶型穩(wěn)定性較好，初始點(diǎn)聚合物雜質(zhì)含量低，且不隨著貯存時(shí)間的延長而明顯明顯。該專利文獻(xiàn)也披露頭孢硫脒國家藥品標(biāo)準(zhǔn)未將頭孢硫脒高分子聚合物列為檢定項(xiàng)目，國內(nèi)的藥學(xué)研究也主要集中在頭孢硫脒的合成與純化，頭孢硫脒及其制劑的純度、含量及相關(guān)雜質(zhì)測定，以及其降解產(chǎn)物的檢測等方面；大多從提高含量、降低雜質(zhì)等方面來提高其穩(wěn)定性，在聚合物含量的考察中其結(jié)果并不理想。該專利文獻(xiàn)披露的聚合物含量測定方法參照“高效分子排阻色譜法測定頭孢硫脒聚合物含量”一文(晏會(huì)根，高效分子排阻色譜法測定頭孢硫脒聚合物含量(J)，海峽藥學(xué)，2010，22(3)：62-64)。該方法具體為采用TSKgel?G2000SWxl，規(guī)格為7.8mm×30cm，5μm色譜柱，以0.01mol/L醋酸鈉溶液：乙腈(93:7)為流動(dòng)相，流速0.5ml/min，檢測波長為254nm；文獻(xiàn)披露是在0.4-2.0mg/ml范圍內(nèi)供試品溶液濃度與峰面積的線性相關(guān)系數(shù)r為0.9989。

但是本發(fā)明人團(tuán)隊(duì)重現(xiàn)上述聚合物檢測方法發(fā)現(xiàn)，該專利文獻(xiàn)披露的分析方法供試品溶液濃度與峰面積的線性相關(guān)系數(shù)r相比本發(fā)明的方法較低，這可能是由于其分離度不夠?qū)е?文獻(xiàn)未披露，本發(fā)明人團(tuán)隊(duì)的重復(fù)結(jié)果為3.4)。