[發(fā)明專利]融合蛋白HP16118P及其在結(jié)核分枝桿菌潛伏感染鑒別診斷中的應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202310379948.1
• 申請日: 2023-04-11
• 公開（公告）號: CN116410274A
• 公開（公告）日: 2023-07-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 龔文平;王杰;劉銀萍;薛勇;程鵬
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍總醫(yī)院第八醫(yī)學(xué)中心
• 主分類號: C07K14/35
• 分類號: C07K14/35;C12N15/62;G01N33/569;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 董函竹

本發(fā)明公開了融合蛋白HP16118P及其在結(jié)核分枝桿菌潛伏感染鑒別診斷中的應(yīng)用。具體地公開了包括串聯(lián)的HTL、CTL和B細(xì)胞表位、HBD?3、PADRE和PSMα4的融合蛋白。本發(fā)明篩選出針對結(jié)核分枝桿菌的35個表位，其具有很好的免疫原性和抗原性且無毒性無致敏性等特點。進(jìn)一步加入輔助肽HBD?3和PADRE來提高融合蛋白的免疫原性，加入PSMα4賦予融合蛋白靶向遞送功能。體外實驗證明HP16118P能刺激人外周血單個核細(xì)胞產(chǎn)生免疫應(yīng)答，是一種優(yōu)勢保護(hù)性抗原。HP16118P作為診斷分子具有制備方法簡單、特異性好、靈敏度高、成本低等優(yōu)點。本發(fā)明對于活動性結(jié)核和結(jié)核潛伏感染的鑒別診斷具有重大價值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于免疫學(xué)領(lǐng)域，涉及融合蛋白HP16118P及其在結(jié)核分枝桿菌潛伏感染鑒別診斷中的應(yīng)用，具體涉及源自于結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium?tuberculosis，MTB)蛋白抗原的HP16118P重組多表位抗原及其在活動性結(jié)核和潛伏性結(jié)核感染的鑒別診斷中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

結(jié)核病(Tuberculosis，TB)是一種由結(jié)核分枝桿菌(Mycobacteriatuberculosis，MTB)感染引起的以呼吸道傳播為主的慢性傳染病。結(jié)核分枝桿菌感染分為潛伏性結(jié)核病感染(Latent?tuberculosis?infection，LTBI)和活動性結(jié)核病(Activetuberculosis，ATB)兩種狀態(tài)。MTB是一種細(xì)胞內(nèi)寄生蟲，屬于放線菌目分枝桿菌科分枝桿菌屬，主要通過攻擊巨噬細(xì)胞并抑制其凋亡來引起長期感染。自20世紀(jì)90年代以來，世界衛(wèi)生組織制定了一系列計劃來阻止結(jié)核病、實現(xiàn)終結(jié)結(jié)核病的偉大目標(biāo)。然而，自新冠疫情以來，2021年新診斷結(jié)核病患者的病例統(tǒng)計數(shù)量有所回升，達(dá)到640萬。這些數(shù)據(jù)提示，結(jié)核病是繼新型冠狀病毒感染之后單一病原體導(dǎo)致死亡的第二大原因。

目前，LTBI的檢測方法包括TST和IFN-γ釋放試驗(Interferon-γreleaseassays，IGRAs)，但這兩類方法均無法鑒別診斷LTBI和ATB。因此，研究高效的LTBI診斷分子并將其應(yīng)用于LTBI的鑒別診斷，提高LTBI診斷的靈敏度和特異度，減少結(jié)核分枝桿菌感染者發(fā)病概率，對TB的預(yù)防和控制具有十分重要的意義。在結(jié)核分支桿菌的殺菌機(jī)制中，表位在觸發(fā)免疫反應(yīng)中發(fā)揮著重要作用。同時，生物信息學(xué)和免疫信息學(xué)的發(fā)展為表位分子的研究提供了便利條件。因此，候選抗原和免疫優(yōu)勢表位的預(yù)測及篩選成為了診斷和預(yù)防LTBI的關(guān)鍵因素。擁有多個優(yōu)勢表位的多表位分子不僅能夠被體內(nèi)更多的MHC分子識別并高效提呈給T細(xì)胞，而且能更有效的彌補(bǔ)因某個優(yōu)勢表位變異引起的病原體的免疫逃逸等問題。

隨著生物信息學(xué)和免疫信息學(xué)的快速發(fā)展，多肽分子已成為最具吸引力的診斷分子開發(fā)策略之一。通過低成本生產(chǎn)技術(shù)，從MTB抗原中鑒定出的肽可以準(zhǔn)確地表征為化學(xué)實體(類似于經(jīng)典藥物)。此外，多肽是化學(xué)定義的化合物，具有良好的穩(wěn)定性。肽的優(yōu)良性質(zhì)奠定了融合蛋白易于運輸和保存的優(yōu)勢。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種多肽融合蛋白及其在結(jié)核潛伏感染鑒別診斷中的應(yīng)用。所要解決的技術(shù)問題不限于所描述的技術(shù)主題，本領(lǐng)域技術(shù)人員通過以下描述可以清楚地理解本文未提及的其它技術(shù)主題。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明首先提供了融合蛋白，命名可為HP16118P，所述融合蛋白可包括串聯(lián)多肽1、串聯(lián)多肽2和串聯(lián)多肽3，所述串聯(lián)多肽1可包括氨基酸序列是SEQ?IDNo.1的第75-89位、第95-111位、第117-133位、第139-151位、第157-170位、第176-193位、第199-213位、第219-233位、第239-256位、第262-276位、第282-299位、第305-320位、第326-339位、第345-360位、第366-381位和第387-401位所示的多肽；