[發明專利]一種核酸釋放劑以及試劑盒

有效

• 申請號: 202310375608.1
• 申請日: 2023-04-11
• 公開（公告）號: CN116083422B
• 公開（公告）日: 2023-07-04
• 發明（設計）人: 成小威;李宇歌;劉佳麗;李美瓊;傅明華;聶晶
• 申請（專利權）人: 蘇州雅睿生物技術股份有限公司;江蘇迅睿生物技術有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12Q1/686
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種核酸釋放劑以及試劑盒，屬于DNA/RNA檢測領域；其技術要點在于：a.體積百分含量為1~12%的表面活性劑；b.摩爾濃度范圍為10?150mM的Tris?HCl；c.摩爾濃度范圍為0.05?1mM的EDTA；d.摩爾濃度范圍為150?400mM的強堿；f.摩爾濃度范圍為5?50mM的尿素；g.摩爾濃度范圍為0.01?5mM?mM的CuClsubgt;2/subgt;；h.體積百分含量為0.1%的DEPC。本發明旨在提供一種核酸釋放劑以及試劑盒，方便進行PCR檢測，操作方便，快捷。

技術領域

本發明涉及一種DNA/RNA檢測領域，更具體地說，尤其涉及一種核酸釋放劑以及試劑盒。

背景技術

呼吸道感染（Respiratory?tract?infection，RTI）是人類最常見的一類疾病，感染人群在任何性別、年齡和地域中發生，是全球范圍內引起人群發病和死亡的最主要原因之一。

呼吸道感染引起的臨床癥狀和體征都較為相似，其臨床表現主要為鼻炎、咽炎、喉炎、扁桃體炎等癥狀，嚴重的可引起氣管炎、支氣管炎及肺炎等，但不同病原體引起的感染，其治療方法、療效和病程也不盡相同。

目前已證明，大部分呼吸道疾病是由病毒引起，其次是細菌、支原體、衣原體感染。

用于診斷呼吸道感染的實驗室方法包括病原體的分離培養、免疫組化分析、血清學和?PCR核酸檢測，后兩者是最常用的方法。診斷呼吸道感染的金標準是分離培養方法；但由于需要特殊培養基、耗時長、實驗條件繁瑣、檢出率相對較低、對呼吸道感染的確診較慢；免疫組化分析操作較為復雜，耗時較長，且價格不菲；因此臨床上一般不用分離培養和免疫組化分析進行呼吸道感染病原體的診斷。血清學檢測診斷結果會滯后，因為檢測通常在疾病發作后?1-2?周或更長時間呈陽性，因此很難將此類檢測結果應用于實際治療決策。

目前針對病原體核酸檢測的熒光PCR技術已經比較成熟?；赑CR的方法靈敏度高，檢測時間短，檢測可在一個工作日內完成，而且還可以在同一反應中同時擴增多個靶標（多重?PCR），因此熒光PCR核酸檢測方法正在成為診斷實驗室中一種快速、經濟和方便的手段。

但是，檢測過程中核酸的提取和純化是整個實驗中比較耗時和繁瑣的步驟，嚴重影響樣本檢測的速度以及現場應用。

迄今為止，核酸提取方法主要有煮沸法、離心柱法以及磁珠法。煮沸法和離心柱法，均存在操作步驟繁瑣，核酸容易污染的不足；磁珠法提取步驟相對簡單，易于自動化提取，但產品價格貴，且儀器密閉艙內提取存在交叉污染的風險。

因此，開發一種能快速釋放核酸、不易造成交叉污染并且對后續核酸檢測實驗無影響的核酸快速釋放方法成為目前亟待解決的問題。

對于上述問題，核心的問題之一是：如何設計一款適宜的核酸釋放劑。

對于一款核酸釋放劑而言，一般均含有：強堿（使細胞或病毒裂解從而釋放核酸）、Tris-HCl（pH值緩沖液、避免核酸的降解，提高核酸的濃度和純度）、表面活性劑（提取可溶性蛋白）、金屬離子螯合劑（能夠與Mg²⁺、Ca²⁺、Mn²⁺、Fe²⁺等金屬離子結合，可防止金屬離子激活蛋白酶，從而減少金屬離子對核酸質量的影響）等。

然而，現今核酸釋放劑的應用性難題在于：人員在采取拭子后，拭子放入核酸釋放劑中，此時，溶液需要等待若干時間，才會進入PCR試驗。這一時間中必然會造成核酸的降解，從而導致PCR試驗結果錯誤。

針對上述難題，現今的做法有兩種方法：

1）拭子放入核酸釋放劑后，低溫保存。

2）增加PCR儀器的投入，盡量減少拭子排隊的時間。

但是上述兩種方法均要投入大量的資金，而且對于一些檢測地點，無法提供上述低溫保存環境。