[發明專利]羊棲菜分段多糖的制備方法及其在制備抗RSV藥物中的應用

在審

• 申請號: 202310367780.2
• 申請日: 2023-04-07
• 公開（公告）號: CN116333182A
• 公開（公告）日: 2023-06-27
• 發明（設計）人: 閆濱;張綿松;白天凱;邢榮蓮;章瑾;田靜;翟烜;王康敏
• 申請（專利權）人: 山東康眾宏醫藥科技開發有限公司
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61K31/715;A61P31/14
• 代理公司: 南京燦爛知識產權代理有限公司 32356
• 代理人: 朱妃

本發明涉及醫藥技術領域，提供羊棲菜分段多糖的制備方法及其在制備抗RSV藥物中的應用。羊棲菜分段多糖由以下步驟制得：(1)羊棲菜粗多糖的制備；(2)中間產物的制備；(3)羊棲菜多糖的制備；(4)將羊棲菜多糖溶于溶劑中，上清液經過不同分子截留板后，再進行冷凍干燥，即得對應分子量的羊棲菜分段多糖。本發明制備的羊棲菜分段多糖對RSV有顯著的抑制作用，其藥物抑毒指數(TI)可達4000以上。

技術領域

本發明涉及醫藥技術領域，尤其涉及羊棲菜分段多糖的制備方法及其在制備抗RSV藥物中的應用。

背景技術

羊棲菜，褐藻門馬尾藻科馬尾藻屬植物，又稱為六角菜、海大麥、玉海草等，其藻體呈黃褐色，是中藥“海藻”的主要植物來源之一。我國海藻資源豐富,其營養和藥用價值較高且形態差異較大，成熟羊棲菜株高30～50cm。羊棲菜的產地主要分布在我國渤海(如遼寧)、東南沿海(如浙江、福建)、黃海(如山東)等暖溫帶海域，在日本、韓國、朝鮮等國也有一定分布。羊棲菜味苦、咸、寒，具有堅軟散結、利水消腫、瀉熱化痰等功效，在中醫臨床上常用于治療瘰疬、睪丸腫痛、痰飲水腫等疾病。

羊棲菜藻體的主要化學成分為羊棲菜多糖，占干藻體物質的50％以上，現代藥理實驗表明，羊棲菜多糖具有抗氧化、抗衰老、抗疲勞、抗腫瘤、抗病毒、抑菌、降血糖及促進生長發育等生物活性。羊棲菜多糖是一類組成結構相似的酸性多糖混合物,分子量大多在3500kDa以下，在目前技術條件下可分離出的羊棲菜多糖主要包括巖藻聚糖硫酸酯、褐藻膠、褐藻多糖硫酸脂以及褐藻淀粉等。

呼吸道合胞病毒(respiratory?syncytial?virus，RSV)是肺病毒屬副黏液科RNA病毒，是從鼻傷風的黑猩猩體內分離，因其可以使病變細胞融合為多核巨細胞，故被稱為呼吸道合胞病毒。RSV常見于溫帶地區春冬季節及熱帶地區雨季條件下，易感人群包括嬰幼兒以及老年人等抵抗力較差的群體，RSV具有爆發時間長，流行地域廣等特點。RSV的傳播途徑主要為飛沫傳播，其次是被污染后的手指將RSV接種到鼻粘膜、眼粘膜等部位,進而誘發感染。

因對嬰幼兒免疫機能研究的不足、母體遺傳引起的幼兒免疫差異及嬰幼兒和老年人等易感人群對RSV免疫應答等不可控因素的存在，使當下尚無針對治療RSV的疫苗或特效藥，西藥治療中如支氣管擴張劑沙丁胺醇、抗炎藥物糖皮質激素等可用于RSV感染輔助用藥，但在臨床上存在影響生長發育、骨代謝等不良反應。而中藥及復方制劑因毒副作用較小,在抗病毒方面擁有獨特的優勢。許多試驗表明中藥能夠下調基因表達，降低炎癥因子的表達量，還可以通過調節機體的免疫力等來發揮其抗RSV作用。

本申請人首次發現羊棲菜多糖對RSV及EV71病毒均有顯著的抑制作用，并申請了專利CN201610763357.4，將羊棲菜粉末與蒸餾水混合后水煮、換液提取，將提取后的濾液濃縮后，加入5％三氯乙酸，離心去除蛋白質，然后將得到的溶液透析后冷凍，加入95％乙醇沉淀多糖，離心取沉淀，真空干燥得到羊棲菜多糖粉末。將上述所得羊棲菜多糖進行抑毒試驗，結果顯示其藥物抑毒指數T?I達到955.43，對病毒具有顯著的抑制作用。但本申請人在深入研究羊棲菜的抗病毒作用機理過程中，發現上述方法制備得到的混合物羊棲菜多糖分子量跨度大，最低分子量在1kDa以下，最高分子量可達幾千kDa，直接影響羊棲菜多糖的活性，削弱了其對RSV的抑制作用，表現為藥物抑毒指數不足。

發明內容

因此，針對上述指出的缺陷和不足，本發明提供羊棲菜分段多糖的制備方法及其在制備抗RSV藥物中的應用，對RSV的抑制作用明顯提高，T?I可達4000以上，對推動抗RSV藥物的實用化進程具有理論和實用的雙重意義，同時為羊棲菜的抗病毒作用機理奠定了基礎。

為達到上述目的，本發明是通過以下技術方案實現的：

羊棲菜分段多糖的制備方法，包括以下步驟：

(1)將羊棲菜粉末與蒸餾水混合，開啟攪拌并進行升溫，加熱至沸騰后繼續攪拌2～4h，取濾液經過濃縮、冷凍干燥得到羊棲菜粗多糖；