[發明專利]一種紅花木棉組織培養快繁方法

在審

• 申請號: 202310361728.6
• 申請日: 2023-04-06
• 公開（公告）號: CN116420619A
• 公開（公告）日: 2023-07-14
• 發明（設計）人: 林妃;郭玉華;尹俊梅;陸錦萍;康勇;李亞梅;周晨冉
• 申請（專利權）人: 中國熱帶農業科學院海口實驗站
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01G31/00;A01G24/12;A01G24/28;A01G24/15
• 代理公司: 深圳市廣諾專利代理事務所(普通合伙) 44611
• 代理人: 董彩玉

1.一種紅花木棉組織培養快繁方法，其特征在于：其方法包括如下步驟：

步驟S1、選取飽滿且無破損的木棉種子，將木棉種子放于燒杯中，用洗衣粉水浸泡10min后，取出再用流水沖洗種子30min，備用，沖洗后的種子置于無菌操作臺用無菌水洗3次，再用75％乙醇消毒1min，將浸泡過的種子取出用無菌水沖洗5次后，再將種子用H₂O₂和NaClO不同消毒處理方法進行消毒，最后用無菌水沖洗5次，放在無菌濾紙上吸干種子表面水分，待接種；

步驟S2、以MS作為基本培養基，附加蔗糖30g/L+卡拉膠7.5g/L+活性炭0.2g/L，將步驟S1得到木棉種子接種至培養基中，初始為暗培養，露白后進行光照處理，在培養室中進行培養；

步驟S3、將木棉無菌種子苗頂芽為誘導材料，接種到以MS培養基為基礎培養基，添加不同激素的培養基中，以MS為對照培養基，每種培養基接種10瓶，每瓶接種5個外植體，置于25-28℃的溫度條件下暗培養一周后，轉置LED照明燈下進行光照10-12小時/天，進行光培養，光照強度為1000-1200lex，在溫度25-28℃條件下培養；

步驟S4、切取木棉頂芽誘導的不定芽帶芽莖段，接入到不同增殖培養基中，每種培養基接種10瓶，每瓶接種5個外植體，并置于LED照明燈光照10-12小時/天，光照強度1000-1200lex，溫度為25-28℃；

步驟S5、切取木棉頂芽誘導的不定芽帶芽莖段，接入到基礎培養基中MS+蔗糖30g/L+卡拉膠7.5g/L和B5+蔗糖30g/L+卡拉膠7.5g/L中，每種培養基接種10瓶，每瓶接種5個外植體，并置于LED照明燈光照10-12小時/天，光照強度1000-1200lex，溫度25-28℃；

步驟S6、選擇生長一致、健壯的叢生芽苗，切取芽苗單株接種到不同生根培養基中，每個處理接種10瓶，每瓶接種2株，置于26-28℃條件下暗培養7d，再置于LED照明燈光照16小時/天，光照強度1000-1200lex，溫度26-28℃條件下培養；

步驟S7、挑選葉色較綠、根系發達的木棉組培苗，木棉組培苗要高于3-5cm，從組織培養室移至實驗室或溫室大棚，瓶內煉苗7d，然后將瓶蓋揭開1/3，放置3d，最后將瓶口完全揭開放置3d后，用鑷子將苗輕輕取出，洗凈培養基，將洗好的苗移栽至不同煉苗基質中，移至光照培養箱培養，光照時間12小時/天。

2.根據權利要求1所述的一種紅花木棉組織培養快繁方法，其特征在于：所述步驟S1中，消毒劑為H₂O₂與水的混合溶液，且H₂O₂與水的比例為1∶1。

3.根據權利要求1所述的一種紅花木棉組織培養快繁方法，其特征在于：所述步驟S2中，培養基的pH值為5.9。

4.根據權利要求1所述的一種紅花木棉組織培養快繁方法，其特征在于：所述步驟S2中，培養室的環境溫度為25-26℃，光照強度為3000lx。

5.根據權利要求1所述的一種紅花木棉組織培養快繁方法，其特征在于：所述步驟S3中，添加不同激素的培養基分別為：

MS+蔗糖30g/L+卡拉膠7.5g/L；

MS+6-BA1.0mg/L+蔗糖30g/L+卡拉膠7.5g/L；

MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖30g/L+卡拉膠7.5g/L；

MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.5mg/L+蔗糖30g/L+卡拉膠7.5g/L；

MS+6-BA1.0mg/L+IAA0.5mg/L+蔗糖30g/L+卡拉膠7.5g/L；

MS+6-BA1.0mg/L+2，4-D0.5mg/L+蔗糖30g/L+卡拉膠7.5g/L。