[發明專利]一種用于評價生物提取酶制品工段產物的方法及應用

在審

• 申請號: 202310360960.8
• 申請日: 2023-04-06
• 公開（公告）號: CN116359315A
• 公開（公告）日: 2023-06-30
• 發明（設計）人: 胡懿俊;汪晨曦;朱俊;余奕超;徐晴曄
• 申請（專利權）人: 上海上藥第一生化藥業有限公司
• 主分類號: G01N27/447
• 分類號: G01N27/447;G01N21/31;G01N33/68
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 鄒玲

1.一種用于評價生物提取酶制品工段產物的方法，其特征在于，其包括以下步驟：

(1)取生物提取酶制品工藝中的某一工段的產物，作為待評估樣；

(2)將所述待評估樣進行稀釋、透析和冷凍干燥，再配制為待測溶液，后根據待測目標蛋白的種類進行聚丙烯酰胺凝膠電泳法檢測，獲得所述工段樣品中待測目標蛋白的含量；

(3)將所述待評估樣配制為待測溶液，經BCA法進行檢測，獲得所述工段樣品中總蛋白質量；

(4)將所述待測目標蛋白的含量乘以所述總蛋白質量，獲得某一工段的產物中待測目標蛋白的質量；

(5)至少重復1次步驟(1)～(4)，以得到生物提取酶制品工藝中的不同工段的產物中的待測目標蛋白的質量，從而對比得出不同工段的產物中待測目標蛋白的損失大小；

或者，得到同一工段中不同批次的產物中的待測目標蛋白的質量，從而對比得出同一工段中不同批次的產物中待測目標蛋白的損失大小；

步驟(2)和步驟(3)的先后順序不限。

2.如權利要求1所述的用于評價生物提取酶制品工段產物的方法，其特征在于，所述酶制品為胰蛋白酶、糜蛋白酶、凝血酶、玻璃酸酶和促皮質素中的一種或多種，較佳地為胰蛋白酶或糜蛋白酶；

和/或，所述待評估樣為工段產品、工段廢液或工段廢固；

其中，當所述待評估樣為工段產品時，所述工段產品的形態較佳地為固體、潮固體、液體或混懸液。

3.如權利要求1所述的用于評價生物提取酶制品工段產物的方法，其特征在于，所述稀釋的過程中，采用的溶劑為水；

和/或，所述稀釋的過程中，當所述待評估樣為潮固體時，所述待評估樣的質量與所述稀釋后溶液的總體積之比為0.03～0.07g/mL，例如0.05g/mL；當所述待評估樣為液體時，所述待評估樣的體積與所述稀釋后溶液的總體積之比為0.1～0.3，例如0.2。

4.如權利要求1所述的用于評價生物提取酶制品工段產物的方法，其特征在于，步驟(2)中，所述透析滿足以下條件中的一種或多種：

(a)所述透析的時間為24～48h，例如24h；

(b)所述透析的透析液為水，較佳地為純化水；

(c)在所述透析的過程中，透析液的狀態為流動狀態或靜置非流動狀態；

較佳地，當所述透析液的狀態為流動狀態時，所述透析液的流速為300～500mL/h，例如400mL/h；

較佳地，當所述透析液的狀態為靜置非流動狀態時，所述透析液的置換次數為3～5次，所述透析液為每10～14h置換一次。

5.如權利要求1所述的用于評價生物提取酶制品工段產物的方法，其特征在于，步驟(2)中，所述冷凍干燥的時間為12～24h，例如18h；

和/或，步驟(2)中，所述冷凍干燥的溫度為-50～-10℃，例如-20℃、-30℃或-37℃。

6.如權利要求1所述的用于評價生物提取酶制品工段產物的方法，其特征在于，步驟(2)和步驟(3)中，所述待測溶液的配制過程中，使用的溶劑為磷酸緩沖液；

其中，所述磷酸緩沖液的濃度較佳地為0.08～0.12mol/L，例如0.1mol/L；

其中，所述磷酸緩沖溶液的pH值較佳地為6.9～7.1，例如7.0。

7.如權利要求1所述的用于評價生物提取酶制品工段產物的方法，其特征在于，進行所述聚丙烯凝膠電泳法檢測時，所述待測溶液的濃度為0.5-10mg/mL，例如1mg/mL、2mg/mL、5mg/mL或8mg/mL；

和/或，所述聚丙烯凝膠電泳法為非還原性聚丙烯凝膠電泳法。