[發(fā)明專(zhuān)利]菌株及其在發(fā)酵產(chǎn)泰樂(lè)菌素中的應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202310344390.3
• 申請(qǐng)日: 2023-04-01
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN116286581A
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-06-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李金娥;魏寶霆;田宇清;譚華榮
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院微生物研究所
• 主分類(lèi)號(hào): C12N1/21
• 分類(lèi)號(hào): C12N1/21;C12N15/31;C12N15/76;C12N15/66;C07K14/36;C12P19/62;C12R1/54
• 代理公司: 北京大田律師事務(wù)所 11941
• 代理人: 姜義民

1.基因在發(fā)酵產(chǎn)泰樂(lè)菌素或構(gòu)建產(chǎn)泰樂(lè)菌素的鏈霉菌中的應(yīng)用，其特征在于，

所述基因包括：強(qiáng)啟動(dòng)子、tylR基因和tylS基因；

所述tylR基因的氨基酸序列如序列表SEQ?ID?NO.1所示；

所述tylS基因的氨基酸序列如序列表SEQ?ID?NO.2所示。

2.依據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述強(qiáng)啟動(dòng)子為P_hrdB啟動(dòng)子、P_ermE*啟動(dòng)子或P_kasO*啟動(dòng)子；

所述P_kasO*啟動(dòng)子的核苷酸序列如序列表SEQ?ID?NO.4所示。

3.依據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述鏈霉菌為弗氏鏈霉菌ATCC?19609或弗氏鏈霉菌tylQ基因阻斷突變株。

4.依據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述弗氏鏈霉菌tylQ基因阻斷突變株為將弗氏鏈霉菌ATCC?19609的tylQ基因敲除；

所述tylQ基因的氨基酸序列如序列表SEQ?ID?NO.3所示。

5.工程菌的構(gòu)建方法,其特征在于，將質(zhì)粒pSET152-RSOE導(dǎo)入鏈霉菌中；

所述質(zhì)粒pSET152-RSOE的構(gòu)建方法是將質(zhì)粒pSET152-SOE酶切片段和質(zhì)粒pSET152-ROE酶切片段連接；

所述酶為限制性?xún)?nèi)切酶EcoR?I和EcoR?V；

所述連接為T(mén)4?DNA連接酶進(jìn)行連接。

6.依據(jù)權(quán)利要求5所述工程菌的構(gòu)建方法,其特征在于，

所述質(zhì)粒pSET152-SOE的構(gòu)建方法是利用限制性?xún)?nèi)切酶EcoR?I對(duì)質(zhì)粒pSET152進(jìn)行線性化后，與以質(zhì)粒pSET152::D-C為模板、利用引物EcoRV-PkasO-F和kasOp2進(jìn)行PCR擴(kuò)增的DNA片段，和以弗氏鏈霉菌ATCC?19609的基因組為模板、利用引物PkasO-tylS-F和EcoRI-tylS-R進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到的DNA片段，進(jìn)行Gibson組裝。

7.依據(jù)權(quán)利要求5所述工程菌的構(gòu)建方法,其特征在于，所述質(zhì)粒pSET152-ROE的構(gòu)建方法是利用限制性?xún)?nèi)切酶EcoR?I和EcoR?V對(duì)質(zhì)粒pSET152進(jìn)行線性化后，與以質(zhì)粒pSET152::D-C為模板、利用引物152-PkasO(S)-F和kasOp2進(jìn)行PCR擴(kuò)增的DNA片段，和以弗氏鏈霉菌ATCC?19609的基因組為模板、利用引物PkasO-tylR-F和EcoRI-tylR-R進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到的DNA片段，進(jìn)行Gibson組裝。

8.依據(jù)權(quán)利要求5所述工程菌的構(gòu)建方法,其特征在于，所述弗氏鏈霉菌包括弗氏鏈霉菌ATCC?19609和弗氏鏈霉菌tylQ遺傳阻斷突變株WT/QKO。

9.依據(jù)權(quán)利要求8所述工程菌的構(gòu)建方法,其特征在于，所述突變株WT/QKO的構(gòu)建方法是將弗氏鏈霉菌ATCC?19609中的tylQ基因敲除。

10.權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述泰樂(lè)菌素為泰樂(lè)菌素A、泰樂(lè)菌素C中一種或多種。