[發明專利]赤芍總單萜苷的應用及赤芍總單萜苷中活性成分的分析方法

在審

• 申請號: 202310333829.2
• 申請日: 2023-03-30
• 公開（公告）號: CN116458575A
• 公開（公告）日: 2023-07-21
• 發明（設計）人: 王麗紅;王超;于洋洋;周彤;趙稷;邱宏斌;張宇;王宇亮;趙宏;孫長海;孟卓異;王天宇;陳潔琳;韓昱
• 申請（專利權）人: 佳木斯大學
• 主分類號: A23K10/30
• 分類號: A23K10/30;G01N30/02;G01N30/72;G01N30/74;G01N30/86;A61K36/71;A61K36/65;A61P21/00;C07G3/00;A61K125/00
• 代理公司: 長春市盈創中成知識產權代理事務所(普通合伙) 22215
• 代理人: 李燕妮

赤芍總單萜苷的應用及赤芍總單萜苷中活性成分的分析方法。本發明首次采用了UPLC?MS/MS技術建立了11批不同產地的赤芍總單萜苷指紋圖譜，為揭示赤芍總單萜苷的有效成分群奠定了基礎。本發明共確定了以赤芍總單萜苷為主的具有增肌作用的5個化合物，其中單萜苷類化合物有4個，有一個屬于苯甲酰芍藥苷的同分異構體。赤芍總單萜苷在制備增加肌肉的動物飼料或藥物中的應用。本發明建立了赤芍總單萜苷指紋圖譜?藥效相關模型，建立了以赤芍總單萜苷有效部位指紋圖譜為基礎的增肌作用的質量評價標準的同時，也為赤芍其他藥理作用活性成分的篩選提供了新的思路。本發明為健身人群增肌食品的開發奠定理論基礎，為畜牧業動物飼料添加劑的開發提供新資源。

技術領域

本發明屬于赤芍總單萜苷用途領域。

背景技術

赤芍Paeoniae?RubraRadix(PRR)為芍藥科(Ranunculaceae)芍藥屬(Paeonia)植物芍藥Paeonia?lactiflora?Pall.或川赤芍P.anomala?subsp.veitchii(Lynch)D.Y.HongK.Y.Pan的干燥根。其氣微香、味微苦、酸澀、微寒，歸肝經，具有清熱涼血、散瘀止痛的功效。現代藥理研究表明，赤芍的藥理活性較多，應用極其廣泛，可用于多種疾病的治療，包括抗菌、抗腫瘤、抗肌肉萎縮等，有著極高的藥用價值。

雖然目前國內外學者對于赤芍治療患有肌肉萎縮小鼠的報道較多，但尚無赤芍對于正常小鼠增肌作用的研究。

發明內容

本發明提供了一種增肌的化合物，另外采用UPLC-MS/MS和多元統計分析方法，建立“譜效關系”模型，從而系統研究赤芍總單萜苷的增肌作用，探索其主要活性成分。本發明方法能夠進一步發掘與藥理作用有效成分相對應的各種藥材，并確定其藥效學物質基礎。本發明為赤芍在健身食品開發上提供基礎，并對能夠增加肌肉的動物飼料的開發提供實驗依據。

本發明中赤芍總單萜苷在制備增加肌肉的動物飼料或藥物中的應用。

進一步地限定，所述動物為哺乳動物。

本發明還提供了赤芍總單萜苷中活性成分的分析方法，具體步驟如下：

步驟1、測定不同產地赤芍總單萜苷的總還原力、·OH^-、·DPPH、·O₂^-與ABTS⁺自由基清除率，設為同等重要，每組數據的最大值作為1，最小值作為0，然后將所有數據歸一化，按公式為Y＝Y1×1/5+Y2×1/5+Y3×1/5+Y4×1/5+Y5×1/5，計算數值后列表，從中分析抗氧化能力強弱；

步驟2、進行拉力和游泳時間，腓腸肌及附睪脂肪指數，及組織病理學實驗并獲取結果；采用SPSS?29.0軟件對上述實驗中所涉及的數據進行處理，計量數據用平均數±標準差-x±s)的形式來表示，并對數據進行重復測量方差分析，以及采用Duncans?multiplerange?test方法進行單因素方差分析，P＜0.05記為具有顯著性差異；

步驟3、精確稱量來自不同來源的3.75g赤芍總單萜苷粉末，分別進行下述操作：用10mL70％(體積)乙醇稀釋，然后取1.0mL以12000r·min^-1高速離心5min，再用0.22μm微濾膜過濾上清液，等待檢測；

步驟4、獲取UPLC-MS/MS數據；

步驟5、然后用Xcalbur?4.2軟件處理，通過對正負離子質譜圖的分析比較，在查閱相關文獻的基礎上，利用二次質譜學的信息，利用ChEMBL數據庫和PubChem網站確定物質組成，得到準確的相對分子質量；

步驟6、將各產地赤芍總單萜苷的總離子色譜圖導入《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統》(2012.130723版)，通過軟件建立赤芍總單萜苷指紋圖譜；