[發(fā)明專利]一種DNA聚合酶

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202310322420.0
• 申請(qǐng)日: 2023-03-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN116286720A
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-06-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫悅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 賽納生物科技（北京）有限公司
• 主分類號(hào): C12N9/12
• 分類號(hào): C12N9/12;C12N15/54;C12P19/34
• 代理公司: 北京格匯專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 16088
• 代理人: 張偉洋

1.DNA聚合酶，包含功能等價(jià)于或位置等價(jià)于9?N?DNA聚合酶氨基酸序列中的Lys464，Gln483，Glu578或Glu580的位置處的氨基酸替換突變。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的聚合酶，其特征在于，其中功能等價(jià)于或位置等價(jià)于Glu580的位置處的所述替換突變包含突變?yōu)锳rg、His、Gln、Asn、Cys、Lys或Trp的突變。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的聚合酶，其特征在于，其中功能等價(jià)于或位置等價(jià)于Glu578的位置處的所述替換突變包含突變?yōu)镚ly、Ala、Gln、His、Lys、Met、Arg或Trp的突變。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的聚合酶，其特征在于，其中功能等價(jià)于或位置等價(jià)于Gln483的位置處的所述替換突變包含突變?yōu)镚ly、Pro、Ser、Phe或Cys的突變。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的聚合酶，其特征在于，其中功能等價(jià)于或位置等價(jià)于Lys464的位置處的所述替換突變包含突變?yōu)長(zhǎng)eu、Ile、Pro、Phe或His的突變。

6.一種DNA聚合酶，其特征在于，其在位置等價(jià)于9?N?DNA聚合酶氨基酸序列SEQ?IDNO:1中的R460和Q461之間斷裂后的組裝重構(gòu)體。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的聚合酶，其特征在于，屬于B族DNA聚合酶，包括B族古細(xì)菌DNA聚合酶、phi29噬菌體DNA聚合酶、人DNA聚合酶-α、T4聚合酶、RB69聚合酶和RB49聚合酶；其中所述B族古細(xì)菌DNA聚合酶來(lái)自選自熱球菌屬、火球菌屬、甲烷球菌屬。

8.一種核酸分子，其特征在于，編碼如權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述的聚合酶。

9.一種表達(dá)載體，其特征在于，包含權(quán)利要求8的核酸分子。

10.一種宿主細(xì)胞，其特征在于，包含權(quán)利要求9的表達(dá)載體。

11.一種將修飾的核苷酸摻入DNA的方法，包括使以下組分相互作用：(i)根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)的聚合酶，(ii)DNA模板；和(iii)?5’-末端磷酸熒光標(biāo)記的核苷酸多磷酸，所述多磷酸是三磷酸、四磷酸、五磷酸、六磷酸、七磷酸、八磷酸或九磷酸。

12.一種用于進(jìn)行核苷酸摻入反應(yīng)的試劑盒，其特征在于，包含如權(quán)利要求11所述的聚合酶和核苷酸。

13.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)的聚合酶的用途，包括用于DNA測(cè)序、DNA標(biāo)記、引物延伸、擴(kuò)增等。

14.一種DNA聚合酶的用途，其特征在于，包括：根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的聚合酶、5’-末端磷酸熒光標(biāo)記的核苷酸多磷酸、測(cè)序緩沖液，測(cè)序緩沖液中包含鎂離子。

15.一種DNA聚合酶的用途，其特征在于，包括：根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的DNA聚合酶，5’-末端磷酸熒光標(biāo)記的核苷酸多磷酸、測(cè)序緩沖液，測(cè)序緩沖液中包含鎂離子；所述聚合酶包含功能等價(jià)于或位置等價(jià)于所述9?N?DNA聚合酶氨基酸序列中的選自Lys464，Gln483，Glu578，Glu580的氨基酸的位置處的至少一個(gè)、至少兩個(gè)、至少三個(gè)或四個(gè)氨基酸替換突變，和/或Leu408，Ala485中的一個(gè)或兩個(gè)替換突變。

16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的用途，其特征在于，Leu408位置處的所述替換突變包含突變?yōu)锳la、Phe、Tyr、His、Gln、Asn或Gly的突變；Ala485位置處的所述替換突變包含突變?yōu)長(zhǎng)eu、Lys、Phe、Arg、Glu、Ile、Trp、His或Thr的突變。