[發(fā)明專利]重組鼠傷寒沙門氏菌基因工程菌HCS1、菌劑及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202310320028.2
• 申請日: 2023-03-28
• 公開（公告）號: CN116478895A
• 公開（公告）日: 2023-07-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄭金海;孫妤婕
• 申請（專利權(quán)）人: 湖南大學(xué)
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/74;C07K14/255;A61K35/74;A61P35/00;A61P1/00;A61P9/00;A61P3/10;C12R1/42
• 代理公司: 北京潤平知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11283
• 代理人: 陳靜

本發(fā)明涉及腫瘤生物治療技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種重組鼠傷寒沙門氏菌基因工程菌HCS1、菌劑及其應(yīng)用。所述基因工程菌HCS1為缺失relA基因和spoT基因的減毒鼠傷寒沙門氏菌，所述減毒鼠傷寒沙門氏菌為鼠傷寒沙門氏菌VNP20009。基因工程菌HCS1不僅能夠正常生長，同時其感染荷瘤小鼠后，能夠靶向到腫瘤部位并進(jìn)行增殖，并顯著降低其對機(jī)體的毒性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及腫瘤生物治療技術(shù)領(lǐng)域，具體地，涉及重組鼠傷寒沙門氏菌基因工程菌HCS1、菌劑及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

現(xiàn)如今，泛指所有惡性腫瘤的癌癥，因?yàn)槠浒┘?xì)胞具有內(nèi)源性、異質(zhì)性和突變抗藥性等特性而成為當(dāng)今生物醫(yī)學(xué)發(fā)展領(lǐng)域的重點(diǎn)和難點(diǎn)。癌癥成為了21世紀(jì)威脅人類生命健康的主要因素之一，因此對于其治療方法的探索顯得愈發(fā)重要。

目前，針對腫瘤的主要治療方式是傳統(tǒng)的手術(shù)、放療及化療的綜合治療，雖然在一定程度上可以緩解患者的疼痛并使腫瘤體積縮小，但這些方法有著明顯的局限性，包括引起腫瘤復(fù)發(fā)、藥物耐受、以及機(jī)體的毒副作用。

近年來，癌癥研究人員研發(fā)出了一種新型癌癥療法，即細(xì)菌介導(dǎo)的腫瘤療法，用來解決目前臨床上傳統(tǒng)治療方式存在的問題。

腫瘤微環(huán)境是指腫瘤存在的細(xì)胞環(huán)境，其很大程度上決定了腫瘤的生存和發(fā)展。由于腫瘤組織中具有不規(guī)則脈管系統(tǒng)導(dǎo)致的低氧、免疫抑制和營養(yǎng)豐富等獨(dú)特的微環(huán)境，兼性厭氧菌可以特異性地在此定居、繁殖，從而顯示出細(xì)菌對腫瘤的高度靶向特異性。因此，細(xì)菌介導(dǎo)的癌癥治療的一個顯著優(yōu)勢在于細(xì)菌能夠選擇性地在腫瘤部位積聚，其在腫瘤中的濃度可以到達(dá)正常組織的一千倍，甚至一萬倍以上。目前被廣泛研究的細(xì)菌包括沙門氏菌、李斯特菌、大腸桿菌等均有顯著的抗腫瘤活性。

在細(xì)菌靶向定殖腫瘤的過程中，細(xì)菌細(xì)胞表面存在的多種病原相關(guān)分子模式(Pathogen-associated?molecular?patterns,PAMPs)，如脂多糖、鞭毛蛋白、核酸等，能夠被機(jī)體的模式識別受體所識別，從而激活相應(yīng)的炎癥信號通路，募集免疫細(xì)胞，引發(fā)強(qiáng)烈的炎癥反應(yīng)，并通過進(jìn)一步激活機(jī)體的固有免疫反應(yīng)與適應(yīng)性免疫反應(yīng)將腫瘤細(xì)胞殺死。

然而，由于沙門氏菌長有鞭毛，可以運(yùn)動，能夠通過多種方式逃避宿主的免疫系統(tǒng)，會持續(xù)性感染宿主，因此其本身會給機(jī)體帶來毒性，產(chǎn)生細(xì)菌治療方面的安全性問題。另一方面，對于工程化的細(xì)菌在輸送某些抗癌藥物到達(dá)腫瘤部位的時候，如果抵抗宿主胃酸、膽鹽的能力受損，會影響其在機(jī)體的定殖能力，并且此時對于評估該腫瘤治療藥物的效果會有很大影響。

減毒的鼠傷寒沙門氏菌是一種兼性厭氧菌，腫瘤組織中有很多缺氧區(qū)域，沙門氏菌可以在腫瘤缺氧區(qū)域內(nèi)富集，腫瘤中的菌落數(shù)遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于其它組織中菌落數(shù)。盡管在臨床前的實(shí)驗(yàn)中，減毒沙門氏菌VNP20009有很好的抗腫瘤作用，但是臨床一期的研究結(jié)果表明VNP20009在人體內(nèi)抗腫瘤的效果不佳，主要表現(xiàn)為：不能有效在腫瘤組織中富集、抗腫瘤效果不顯著。

因此，有必要構(gòu)建一種抑制腫瘤效果好且毒力弱化的細(xì)菌菌株。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了提供一種毒力降低，同時能夠減少細(xì)菌靶向腫瘤的過程中對機(jī)體正常組織的破壞的細(xì)菌菌株，進(jìn)而提高細(xì)菌靶向治療腫瘤的安全性。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的第一方面提供一種重組鼠傷寒沙門氏菌基因工程菌HCS1，所述基因工程菌HCS1為缺失relA基因和spoT基因的減毒鼠傷寒沙門氏菌，所述減毒鼠傷寒沙門氏菌為鼠傷寒沙門氏菌VNP20009；

所述relA基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示，所述spoT基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。

本發(fā)明的第二方面提供一種菌劑，所述菌劑中含有前述第一方面中所述的重組鼠傷寒沙門氏菌基因工程菌HCS1。