[發明專利]用于豬鏈球菌通用型及2型、7型、9型檢測的四重熒光PCR試劑盒

在審

• 申請號: 202310314266.2
• 申請日: 2023-03-28
• 公開（公告）號: CN116287348A
• 公開（公告）日: 2023-06-23
• 發明（設計）人: 柳暢;馬玉文豪;賈欽瑞;肖敏;潘廷云;王炎焱
• 申請（專利權）人: 江西正邦科技股份有限公司;廈門普康同創生物科技有限公司;江西正邦農業科學院
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/46
• 代理公司: 南昌華成聯合知識產權代理事務所(普通合伙) 36126
• 代理人: 張建新

本發明涉及豬鏈球菌多重熒光PCR檢測技術領域，具體涉及一種用于豬鏈球菌通用型及2型、7型、9型檢測的四重熒光PCR試劑盒。本發明提供的用于豬鏈球菌通用型及2型、7型、9型檢測的四重熒光PCR試劑盒，包括PCR預混合液2×TaqPCR?MasterMix以及用于檢測豬鏈球菌及2型、7型、9型的四對特異性引物和探針構成的檢測體系，能夠實現豬鏈球菌病血清型分型檢測。該試劑盒操作簡單便利，試劑盒特異性好，敏感性高。

技術領域

本發明涉及豬鏈球菌多重熒光PCR檢測技術領域，具體涉及一種用于豬鏈球菌通用型及2型、7型、9型檢測的四重熒光PCR試劑盒。

背景技術

豬鏈球菌是具有莢膜的一種革蘭氏陽性球菌。可根據其細胞壁抗原成分將其大致歸類為蘭氏分群(Lancefieldgroup?D)D群鏈球菌。根據其莢膜抗原(CPS)的不同，豬鏈球菌被分為35(1～34型,1/2型)種血清型,其中1，2，7，9型是豬的致病菌。豬鏈球菌的定植部位為豬的上呼吸道，尤其是扁桃體和鼻腔。部分血清型的豬鏈球菌具有致病性，主要通過傷口感染。可引起豬的急性敗血癥(septicemia?with?sudden?death)、腦膜炎(meningitis)、關節炎(arthritis)、心內膜炎(endocarditis)、肺炎(pneumonia)等疾病。部分菌株可引起人類感染，造成細菌性腦炎(bacterial?meningitis)或引起中毒樣休克綜合征(toxicshock-like?syndrome)。

目前已有的針對豬鏈球菌分型的方案，主要包括以下幾種：(1)傳統分型法：傳統的鏈球菌分型法主要基于糖基化抗原的結構差異，如通過血清凝集反應、免疫印跡等方法，對鏈球菌進行分型。但這種方法對不同菌株之間的差異鑒定不夠敏感，且可能會出現假陽性或假陰性的情況。(2)PCR分型法：PCR技術可以針對不同基因片段進行擴增，從而進行豬鏈球菌的分型。例如，cps基因、cps2J基因、lytA基因等均可以作為分型的靶標基因。其中cps基因編碼鏈球菌多糖合成的酶，通過cps基因片段擴增，可以將豬鏈球菌分為不同的血清型。(3)MLST分型法：MLST(Multi-Locus?Sequence?Typing)是一種廣泛應用于微生物分子流行病學研究中的分型方法。通過對多個核心基因進行序列分析，確定不同鏈球菌菌株之間的基因型差異，以此進行分型。(4)全基因組測序：可以獲取完整的基因組序列，對菌株進行高分辨率的分型和演化研究，但存在時間長，費用高等問題。

發明內容

本發明的目的在于提供一種用于豬鏈球菌通用型及2型、7型、9型檢測的四重熒光PCR試劑盒，實現豬鏈球菌病血清型分型檢測。

本發明提供一種用于豬鏈球菌通用型及2型、7型、9型檢測的四重熒光PCR試劑盒，包括PCR預混合液2×TaqPCR?MasterMix以及用于豬鏈球菌通用型檢測及2型、7型、9型檢測的四對特異性引物和探針構成的檢測體系，其中：

用于豬鏈球菌通用型檢測及2型、7型、9型檢測的四對特異性引物以及探針的核苷酸序列如下：

其中，所述探針的激發熒光基團選自FAM、VIC、ROX、Cy5；所述探針的淬滅基團選自BHQ1和BHQ2。

優選地，所述豬鏈球菌通用型探針5′端標記的熒光基團為FAM，對應的3′端標記的淬滅基團為BHQ1；所述豬鏈球菌2型探針5′端標記的熒光基團為VIC，對應的3′端標記的淬滅基團為BHQ1；所述豬鏈球菌7型探針5′端標記的熒光基團為ROX，對應的3′端標記的淬滅基團為BHQ2；所述豬鏈球菌9型探針5′端標記的熒光基團為CY5，對應的3′端標記的淬滅基團為BHQ2。