[發明專利]抑制人FAM86B1基因表達的siRNA及FAM86B1低表達的細胞系

在審

• 申請號: 202310312802.5
• 申請日: 2023-03-28
• 公開（公告）號: CN116179552A
• 公開（公告）日: 2023-05-30
• 發明（設計）人: 謝水林;李伍新
• 申請（專利權）人: 廣東明珠生物技術有限公司
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;A61K31/713;A61P35/00;C12N5/10
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 溫可睿

本發明涉及基因工程技術領域，具體涉及抑制人FAM86B1基因表達的siRNA及FAM86B1低表達的細胞系。本發明公開的siRNA能夠抑制人膠質瘤細胞中FAM86B1基因的表達。利用所述siRNA構建FAM86B1低表達的人膠質瘤細胞模型，研究FAM86B1在人膠質瘤發生發展中的重要作用，有助于揭示人膠質瘤形成的潛在機制，為膠質瘤的臨床治療提供有價值的依據。

技術領域

本發明涉及基因工程技術領域，具體涉及抑制人FAM86B1基因表達的siRNA及FAM86B1低表達的細胞系。

背景技術

FAM86B1(序列相似性家族86成員B1)是一種蛋白質編碼基因，當前已有研究證明其能夠啟動甲基轉移酶活性，參與甲基化過程，然而其在人類膠質母細胞瘤的發生發展中的作用機制還并不明確。

人類膠質瘤細胞系U251在膠質母細胞瘤的研究中常用作實驗模型，可用于提取腫瘤干細胞以及膠質細胞瘤發展機制、藥物抗膠質細胞瘤生長的研究等，適合于基因敲除、基因敲低和基因敲入，是基因編輯領域的熱門細胞系。

人類膠質母細胞瘤細胞系U-87具有上皮形態，可以在裸鼠體內產生與膠質母細胞瘤一致的惡性腫瘤，是最常見的腦腫瘤研究模型。除了常用于腦癌研究，U-87細胞還廣泛應用于生物醫藥產業，如病理生理學研究、藥物篩選、癌癥藥物的研究等，具有廣闊的市場前景。

小干擾RNA(Small?interfering?RNA，siRNA)，又稱沉默RNA或短干擾RNA，為長度20～25個堿基對的雙鏈RNA分子，它通過識別互補的靶基因mRNA，誘導其發生降解，從而抑制靶基因的表達。siRNA能夠應用于臨床，達到治療目的的首要前提是實現靶組織或靶細胞的有效遞送。當前主要有兩種遞送方式，一為裸siRNA或化學修飾siRNA的直接遞送，包括工程化納米粒子、化學基團修飾、蛋白質或多肽包被后遞送等；二為借助基因工程病毒載體的遞送，即利用編碼短發夾RNA(short?hairpin?RNA，shRNA)基因的慢病毒、腺病毒、腺相關病毒感染細胞，在胞內轉錄生成siRNA。使用病毒載體的最大優勢是單次給藥之后可獲得長期RNA干擾效應。基于siRNA互補已知序列靶基因的特異性、可修飾性、高干擾效率等優勢，siRNA已逐漸成為研究基因功能與藥物靶點的重要工具。

發明內容

有鑒于此，本發明要解決的技術問題在于提供抑制人FAM86B1基因表達的siRNA及FAM86B1低表達的細胞系。本發明提供了抑制人FAM86B1基因表達的三個siRNA，并構建了FAM86B1基因低表達的人膠質瘤U251與U87細胞系。

本發明提供了siRNA，其正義鏈具有如SEQ?ID?NO：1～3任一項所示的核酸序列；其反義鏈具有如SEQ?ID?NO：4～6任一項所示的核酸序列。

具體的，所述siRNA的正義鏈和反義鏈分別具有如SEQ?ID?NO：1和SEQ?ID?NO：4所示的核酸序列；或

其正義鏈和反義鏈分別具有如SEQ?ID?NO：2和SEQ?ID?NO：5所示的核酸序列；或

其正義鏈和反義鏈分別具有如SEQ?ID?NO：3和SEQ?ID?NO：6所示的核酸序列。

本發明針對人源FAM86B1的序列，設計了三組靶向該基因的雙鏈siRNA，將所述三組siRNA分別轉染到細胞中，發現三組siRNA對FAM86B1有不同程度的干擾。

因此本發明提供了所述siRNA在制備抑制FAM86B1表達的試劑中的應用。

本發明提供了一種抑制FAM86B1表達的試劑，其包括本發明所述的siRNA以及可接受的助劑或載體。所述助劑包括但不限于催化劑、引發劑、乳化劑、分散劑、阻聚劑、終止劑、氧化劑、分子量調節劑、擴鏈劑、中和劑、脫水劑、溶劑、稀釋劑或溶劑。所述載體包括但不限于用于病毒包裝的輔助載體、用于噬菌體包裝的輔助載體，和/或用于真核或原核宿主細胞基因組整合的輔助載體，本發明對此不做限定；