[發明專利]一種灌注快速透明組織的方法

在審

• 申請號: 202310305265.1
• 申請日: 2023-03-27
• 公開（公告）號: CN116202847A
• 公開（公告）日: 2023-06-02
• 發明（設計）人: 宮川惠;何鋮;袁野;呂廣明
• 申請（專利權）人: 南通大學
• 主分類號: G01N1/30
• 分類號: G01N1/30;G01F17/00;G01B21/28
• 代理公司: 北京科家知識產權代理事務所(普通合伙) 11427
• 代理人: 曹振中

本發明提供一種灌注快速透明組織的方法，涉及組織三維重構研究技術領域，包含以下步驟：S1：選材：S2：經心灌注透明試劑；S3：檢測透明后組織的各項物理數據。本發明利用小鼠全身循環系統，增加透明試劑與組織器官的接觸，在保留原技術透明效果的同時，顯著減少透明時長，數據分析的結果清晰可靠，實驗方法簡便易行。

技術領域

本發明涉及組織三維重構研究技術領域，尤其涉及一種灌注快速透明組織的方法。

背景技術

組織透明技術的問世是在20世紀初由WernerSpalteholz發明的，從此打開了該技術的大門，尤其是在近十年，由于熒光分子標記技術和顯微鏡技術的發展，組織透明技術呈現出井噴式的發展趨勢，短短十幾年涌現出幾十種組織清除技術及其技術變種。組織透明技術是現代科技技術發展的綜合交叉產物，也是一個高速發展的技術，更是一個應用特別廣泛的技術，不僅應用于基礎醫學和生物學研究的各個領域，更廣泛運用于臨床的各個方面，因此組織透明技術具有廣泛的應用價值和前景。該技術發展如此迅速肯定有別的技術無可取代的優勢，那便是可以保持組織完整性的情況下，將組織透明化后對其進行三維成像，這對于正常組織的空間結構的理解或病理組織病理變化的理解都有極大的幫助。

由于組織成分包括水、蛋白質、脂質、礦物分子以及其他的一些色素分子，這些物質的折射率不同，且在不同的組織中含量不同，當光線進入組織時，會因為這些物質的存在而形成光吸收和光散射。組織透明技術通過脫脂、脫鈣、脫色、脫水、折射率匹配等步驟使組織樣本折射率達到一致，從而實現光學透明。

現有的組織透明技術主要分為三類。第一類為基于有機溶劑的組織透明技術，又稱為疏水性組織透明技術，如DISCO技術；第二類為基于水凝膠技術的組織透明技術，如CLARITY技術；第三種為基于水溶性溶劑的組織透明技術，又稱為親水性組織透明技術，如CUBIC技術。其中由于親水性組織透明技術所用試劑安全無毒，所以該技術應用廣泛，變種最多。但其缺點明顯，需要較長組織透明時間，實驗周期長，透明效率低且透明后的組織會膨脹變形。

因此，需要一種能夠提高組織透明效率、操作簡單且經濟實惠的組織透明技術。

發明內容

本發明的目的是為了解決現有技術中缺乏。

為了實現上述目的，本發明采用了如下技術方案：

一種灌注快速透明組織的方法，包含以下步驟：

S1：選材：

S2：經心灌注透明試劑；

S3：檢測透明后組織的各項物理數據。

優選的，所述S1中選用成年雌性小鼠，麻醉處理后固定在操作臺上，并對小鼠進行剖腹處理，暴露其心臟組織。

優選的，所述S2中具體步驟為：將輸液針穿刺至小鼠心臟中，使用蠕動泵將透明試劑灌注至小鼠的心臟中。

優選的，所述透明試劑包括4℃生理鹽水、4℃4％多聚甲醛、200ml37℃CUBIC-P試劑，三種試劑分別注射。

優選的，所述CUBIC-P試劑由5wt％1-甲基咪唑，10wt％正丁基二乙醇胺，5wt％TritonX-100組成。

優選的，灌注速度調節為14ml/min。

優選的，所述數據包括平均灰度值、透明前后體積及面積的變化。

上述所述的一種灌注快速透明組織方法，利用小鼠全身循環系統，增加透明試劑與組織器官的接觸，顯著減少透明用時，并解決了原技術透明后的膨脹問題，數據分析的結果清晰可靠，實驗方法簡便易行。

附圖說明

圖1為本發明一實施方式中一種灌注快速透明組織方法與被動浸泡CUBIC技術的流程圖；