[發明專利]一種桑黃菌種生長培育培養基的研究

在審

• 申請號: 202310304083.2
• 申請日: 2023-03-27
• 公開（公告）號: CN116286400A
• 公開（公告）日: 2023-06-23
• 發明（設計）人: 任思竹;解春艷;陳文杰;周志國;馬思嘉
• 申請（專利權）人: 廊坊師范學院
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N1/38;C12R1/645
• 代理公司: 重慶市信立達專利代理事務所(普通合伙) 50230
• 代理人: 楊逍

1.一種桑黃菌種生長培育培養基的實驗方法，其特征在于，具體包括以下步驟：

S1.藥品儀器準備

儀器準備電子分析天平、烘箱、離心機和移液器，藥品準備氯化鉀、氯化銨、蛋白胨、酵母浸粉和瓊脂，預先準備的由實驗室自行選育的桑黃菌種；

S2.預備試劑

預備DNS試劑、考馬斯亮藍顯色液、0.2mg/mL的葡萄糖標準液、0.6mg/mL的葡萄糖標準液；

S3.培養基預備

預備固體母種培養基、固體基礎培養基、液體基礎培養基；

S4.固體培養基優化

進行固體培養基的制備方法，然后對碳源、氮源、無機鹽進行篩選；

S5.液體培養基優化

依次進行菌種發酵、單因素篩選實驗、菌球直徑大小測定、菌絲干重的測定、蛋白質含量測定、3,5-二硝基水楊酸法測定還原糖含量實現液體培養基的優化；

S6.進行正交試驗

將固體培養基中的得到的最適碳源、氮源、無機鹽并在液體培養基驗證后，利用前期實驗所得數據以碳源、氮源和無機鹽設計影響菌絲生長的三個因素設計正交實驗，以菌絲長速為衡量依據，結合菌落邊緣整齊度特征確定一種最佳適合桑黃生長的人工合成的培養基。

2.根據權利要求1所述的一種桑黃菌種生長培育培養基的研究方法，其特征在于：所述步驟S4中固體培養基優化具體包括以下步驟：

1).固體培養基的制備方法

200g去皮馬鈴薯切條，加水后將馬鈴薯煮至酥而不爛，四層紗布過濾汁液到容器中，準確稱取其他藥品在小燒杯中溶解后定容至1000mL，最后分裝入三角瓶，每個500mL三角瓶裝培養基200mL，無菌過濾膜封口包扎牛皮紙后，置于121℃滅菌30min，將滅完菌的培養基及固體培養皿、酒精燈、打火機實驗用品放置在超凈工作臺上用紫外燈照射30min，嚴格按照無菌操作的要求，將培養基倒入玻璃培養皿中，待其凝固后接種。

2).碳源、氮源、無機鹽的篩選

在超凈工作臺上，高壓滅菌后的不同固體培養基中分別用直徑大小為0.5mm打孔器接長勢良好的母種菌塊于平板中央，進行3次重復，接種后25℃的黑暗環境培養，一段時間后，十字交叉法測量菌絲生長速度，并記錄菌絲長勢、菌落邊緣整齊度相關指標SPSS20.0軟件進行數據統計學分析。

3.根據權利要求1-2任意一項所述的一種桑黃菌種生長培育培養基的分析方法，其特征在于，具體包括以下步驟：

①.固體培養基優化實驗

依次進行不同碳源對桑黃菌絲體的影響、不同氮源對桑黃菌絲體的影響、不同無機鹽對桑黃菌絲體的影響的研究；

②.液體培養基優化實驗

依次進行不同碳源對桑黃菌絲體的影響、不同氮源對桑黃菌絲體的影響和不同無機鹽對桑黃菌絲體的影響的研究；

③.最終總結

基于上述研究最終總結桑黃菌絲在什么條件下生長速度最大，生長勢最好。

4.根據權利要求3所述的一種桑黃菌種生長培育培養基的研究方法，其特征在于：所述步驟②為不同碳源對桑黃菌絲體的影響需桑黃菌絲在不同碳源培養基上生長各不相同進行對比。

5.根據權利要求4所述的一種桑黃菌種生長培育培養基的研究方法，其特征在于：所述步驟②中不同氮源對桑黃菌絲體的影響需在測定桑黃菌絲的生長速率基礎上，進行不同氮源的相關研究，不同氮源對菌絲生長各不相同進行對比。

6.根據權利要求1所述的一種桑黃菌種生長培育培養基的研究方法，其特征在于：所述步驟②中不同無機鹽對桑黃菌絲體的影響需在測定桑黃菌絲的生長速率基礎上，不同無機鹽對菌絲生長各不相同進行對比。