[發明專利]一種大豆苷元應用于緩解冷應激導致的肝損傷的實驗方法

在審

• 申請號: 202310298972.2
• 申請日: 2023-03-24
• 公開（公告）號: CN116270603A
• 公開（公告）日: 2023-06-23
• 發明（設計）人: 郭景茹;逯靜靜;徐彬;張守峰;聶君書
• 申請（專利權）人: 黑龍江八一農墾大學
• 主分類號: A61K31/352
• 分類號: A61K31/352;A61P1/16;A01K67/027;G01N33/68
• 代理公司: 廣州焜鴻知識產權代理事務所(普通合伙) 44967
• 代理人: 李瑞林

1.一種大豆苷元應用于緩解冷應激導致的肝損傷的實驗方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、選取40只6-8周年齡的ICR雄性SPF級小鼠分為四組，每組10只，A：空白對照組(Notreatment，NT)；B：單加DZ組(治療組)；C：冷應激模型組(Cold)；D：冷應激模型組+DZ治療組(Cold+DZ)；

S2、將Cold組和Cold+DZ組小鼠放置在4±1℃的低溫恒溫箱內用來建立Cold模型，冷應激條件為，模型組小鼠每天被放置在4±1℃的低溫恒溫箱內4小時，冷應激周期為連續7天；

S3、在構建Cold模型的前3天以口服灌胃的方式進行給藥，給藥濃度為100mg/kg，給藥體積為100μL；

S4、將Cold組和Cold+DZ組小鼠經過冷應激處理后，取出兩組小鼠的相同部位肝臟分別制成5份樣本，用干凈的濾紙蘸干表面血跡，將一部分肝臟組織浸泡在4％甲醛溶液中用于石蠟切片的制作；

S5、將四組小鼠分別取出部分左葉相同部位肝臟組織用于肝臟髓過氧化物酶(MPO)的測定；

S6、取出部分右葉相同部位肝臟組織應用Western?blot技術檢測肝臟組織中促炎蛋白酶iNOS的蛋白水平。

2.根據權利要求1所述的一種大豆苷元應用于緩解冷應激導致的肝損傷的實驗方法，其特征在于：所述S4中石蠟切片的制作方法為：冷應激后小鼠的新鮮肝臟浸泡在4％的甲醛溶液48h，然后經過梯度酒精脫水、二甲苯透明、包埋、切片、HE染色等實驗步驟獲取實驗結果。

3.根據權利要求1所述的一種大豆苷元應用于緩解冷應激導致的肝損傷的實驗方法，其特征在于：步驟S5中MPO的測定方法為：取一塊冷應激后小鼠的新鮮肝臟組織放在22mL平底研磨管中，1000mg的組織加入4000μL的HEPES溶液，研磨10min，離心棄去上清液體，在50HZ的條件下研磨10min，然后在轉速為12000r/min的條件下離心5min，再次取上清液為MPO的檢測樣本。

4.根據權利要求1所述的一種大豆苷元應用于緩解冷應激導致的肝損傷的實驗方法，其特征在于：步驟S6中Western?blot的測定方法為：將新鮮的小鼠肝臟組織加入2mL平底研磨管中，研磨管中加入蛋白裂解液500μL，研磨用鋼珠7顆，研磨10min后，離心取上清液作為蛋白原液，然后分裝為60μg/15μL的樣品。