[發明專利]特異性結合胰激肽原酶的納米抗體及其應用

在審

• 申請號: 202310297902.5
• 申請日: 2023-03-24
• 公開（公告）號: CN116479003A
• 公開（公告）日: 2023-07-25
• 發明（設計）人: 先宗樹;穆寧;朱慶慶;孫國威;阮必武
• 申請（專利權）人: 上海慧譜瑞生物技術有限公司
• 主分類號: C12N15/13
• 分類號: C12N15/13;C07K16/40;C12N15/81;C12N1/19;C12N9/64;G01N33/573;C12R1/84
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 鄭暄;豆欣欣

本發明提供了一種特異性結合胰激肽原酶的納米抗體，其中，所述的納米抗體的核苷酸序列如SEQ?ID?No.1、3、5任一所示。本發明還提供了相應的應用。本發明成功篩選鑒定出具有良好表達活性的抗胰激肽原酶納米抗體，采用畢赤酵母系統進行表達生產，可大幅度地降低生產成本，更有利于該抗體的產業化；還成功構建了以抗胰激肽原酶納米抗體作為配件的純化填料，為后續純化胰激肽原酶奠定良好的基礎。

技術領域

本發明屬于生物醫學或生物制藥技術領域，具體涉及一種特異性結合胰激肽原酶的納米抗體及其應用。

背景技術

胰激肽原酶是一種蛋白水解酶類藥物，目前主要從豬的胰腺中提取而得，主要由4種糖和18種氨基酸所組成，是人體組織和哺乳動物中的一種激肽釋放酶，是生物體內激肽釋放酶-激肽系統的重要成員，在體內以無活性的前體一激肽釋放酶原形式存在，能使激肽原降解成激肽發揮藥理作用，能擴張血管和毛細血管，增加血管通透性，改善微循環，起調節血壓等作用；能降低心肌耗氧量；能激活磷酸脂酶A2，促使腎髓質分泌前列腺素E2，抑制氧化應激，增加血流量；促進前列環素(PGI2)分泌，抑制血栓素(TXA2)生成，避免血小板過度聚集，降低血粘度，預防血栓形成，避免加重腎臟微循環損害；通過激活激肽系統，擴張腎小球動脈壁和毛細血管，可顯著改善微循環，使腎臟毛細血管功能得以恢復，從而抑制系膜細胞增殖、基底膜的增厚，延緩糖尿病腎病的進展。

納米抗體是一類源于駱駝科動物體內的只有可變區結構的單克隆抗體，分子量約為15KD，常規抗體的十分之一。相比于常規的單抗，納米抗體具有高組織滲透性、高穩定性、高溶解度和低聚集性以及易于克隆等優點。常規單克隆抗體大多采用哺乳動物細胞進行培養生產，而納米抗體能夠利用微生物系統發酵生產，這樣能大大縮短開發時間及顯著降低生產開發成本。因此，納米抗體具有便于下游開發應用的諸多優勢。

目前胰激肽原酶的成熟純化工藝主要是采用多步有機溶劑沉淀的方法獲得，生產效率較低，耗費大量人力物力和有機溶劑，且市面上尚沒有針對胰激肽原酶的親和純化方法。

發明內容

本發明的主要目的就是針對現有技術中的問題，提供一種特異性結合胰激肽原酶的納米抗體及其應用。

為達到上述目的，本發明一方面提供了一種特異性結合胰激肽原酶的納米抗體，其主要特點是，所述的納米抗體的核苷酸序列如SEQ?ID?No.1、3、5任一所示。

本發明另一方面提供了一種特異性結合胰激肽原酶的納米抗體，其主要特點是，所述的納米抗體的氨基酸序列如SEQ?ID?No.2、4、6任一所示。

本發明還提供了一種重組載體，其主要特點是，包括編碼所述的納米抗體的核苷酸序列。

本發明還提供了一種重組菌，其主要特點是，包括所述的重組載體，例如酵母細胞。

本發明還提供了所述的特異性結合胰激肽原酶的納米抗體的用途，其主要特點是，用于純化胰激肽原酶；或，檢測胰激肽原酶的水平。

本發明還提供了一種層析填料，其主要特點是，所述的層析填料包括相偶聯的基礎介質和配基，所述的配基為所述的納米抗體。

較佳地，所述的基礎介質為瓊脂糖微球、聚苯乙烯-二乙烯基苯微球、或聚甲基丙烯酸酯微球。

本發明還提供了一種胰激肽原酶純化方法，其主要特點是，采用所述的層析填料對胰激肽原酶進行免疫親和層析。

本發明還提供了一種試劑盒，其主要特點是，所述的試劑盒含有所述的納米抗體，用于檢測胰激肽原酶的水平。

附圖說明

圖1為實施例1中納米抗體文庫的富集結果。

圖2為納米抗體EC50結合活性結果圖。

圖3為實施例2中發酵過程的條件示意圖。