[發明專利]PECAM-1靶向性診療一體化納米探針及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202310295680.3
• 申請日: 2023-03-24
• 公開（公告）號: CN116370660A
• 公開（公告）日: 2023-07-04
• 發明（設計）人: 梅恒;胡豫;陳釗釗;羅麗麗
• 申請（專利權）人: 華中科技大學同濟醫學院附屬協和醫院
• 主分類號: A61K51/10
• 分類號: A61K51/10;A61K51/12;A61K38/55;A61K47/68;A61K47/69;A61P29/00;A61P9/14;A61K103/30
• 代理公司: 武漢信合紅谷知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 42264
• 代理人: 解波

本發明屬于納米探針技術領域，具體公開PECAM?1靶向性診療一體化納米探針及其制備方法和應用。包括獲取PECAM?1_4G6mAb：將肼基煙酰胺與PECAM?1_4G6在酸性環境下反應，將反應所得產物過濾后在還原劑條件下與放射性核素洗液反應，獲得PECAM?1_4G6mAb；獲取αPECAM?1_AT@HCNPs：向HCNPs納米粒的水溶液中加入足量N,N'?碳酸二琥珀酰亞胺基，加入PECAM?1_4G6mAb，室溫反應，得到αPECAM?1?HCNPs納米粒水溶液，然后將αPECAM?1_HCNPs納米粒子與抗凝血酶等比例共同溶解，使抗凝血酶通過靜電作用吸附負載至PECAM?1_HCNPs納米粒子上，純化獲得αPECAM?1_AT@HCNPs。本發明：利用具有適合CAR?T治療時間窗半衰期(6～8天)的核素標記單鏈抗體4G6早期捕捉CRS靶器官微血管顯影。

技術領域

本發明屬于納米探針技術領域，尤其涉及PECAM-1靶向性診療一體化納米探針及其制備方法和應用。

背景技術

嵌合抗原受體T細胞免疫療法(CAR-T)最嚴重的不良反應系細胞因子風暴(CRS)，發生率約77％～85％。CRS系由CAR-T細胞回輸后在體內激活后快速增殖，細胞因子(CK)過度級聯釋放所致，造成患者高熱、低血壓、呼吸困難、凝血障礙、終末器官障礙等，嚴重者甚至死亡。目前CRS分級主要由臨床表現判斷，缺乏客觀指標；常用細胞因子監測，指標升高出現較晚，且閾值難以量化。現有的研究雖然發現了CAR-T療法中導致CRS發生的部分機理，但是均未針對此作出適應性研究，未研究能否通過相應的靶點實現對CRS的監測和治療。因此探索與CRS直接相關的早期分子標志及可視化技術，建立監測與干預新手段將有助于其臨床診治。

發明內容

針對上述問題，本發明提供PECAM-1靶向性診療一體化納米探針及其制備方法和應用，主要為了解決現今暫時還沒有較好的對CRS分級進行分級、較難實現可視化檢測CRS直接相關的早期分子標志等問題。

為了解決上述問題，本發明采用如下技術方案：

本發明第一方面涉及PECAM-1診療一體化納米探針的制備方法，包括下述步驟

S1、獲取放射性核素標記的PECAM-1_4G6mAb：將肼基煙酰胺與PECAM-1-4G6在酸性環境下反應，將反應所得產物過濾后在還原劑條件下與放射性核素洗液反應，獲得核素標記的PECAM-1_4G6?mAb；

S2、獲取αPECAM-1-AT@HCNPs：向HCNPs納米粒的水溶液中加入足量N,N'-碳酸二琥珀酰亞胺基，混勻，透析，加入核素標記的PECAM-1_4G6mAb，室溫反應，得到αPECAM-1_HCNPs納米粒水溶液，然后將αPECAM-1_HCNPs納米粒子與抗凝血酶等比例共同溶解，使抗凝血酶通過靜電作用吸附負載至PECAM-1_HCNPs納米粒子上，純化獲得αPECAM-1_AT@HCNPs。

在部分情況中，所述放射性核素為¹⁷⁷Lu；所述還原劑為碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)，室溫條件下攪拌反應12h。

在部分情況中，步驟S2中：加入¹⁷⁷Lu標記的PECAM-1_4G6?mAb，室溫攪拌反應后獲得¹⁷⁷Lu-αPECAM-1-HCNPs納米粒水溶液。室溫條件下酰胺反應效率較高，偶聯效率高。

在部分情況中，步驟S2中，抗凝血酶靜電吸附負載至抗凝血酶后：進行超濾，出去未包載負載的抗凝血酶，獲得純化的αPECAM-1_AT@HCNPs。

在部分情況中，步驟S2中：αPECAM-1_HCNPs納米粒子與抗凝血酶等比例共同溶解于超純水，攪拌反應，使抗凝血酶靜電負載。