[發(fā)明專利]一種提高唾液酸乳糖產(chǎn)量的基因工程菌及其生產(chǎn)方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202310277210.4 | 申請日： | 2023-03-21 |
| 公開（公告）號： | CN116478894A | 公開（公告）日： | 2023-07-25 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 張濤;李晨晨;李夢麗 | 申請（專利權(quán)）人： | 江南大學(xué) |
| 主分類號： | C12N1/21 | 分類號： | C12N1/21;C12N15/54;C12N15/55;C12N15/60;C12N15/61;C12N15/56;C12P19/26;C12R1/19 |
| 代理公司： | 哈爾濱市陽光惠遠(yuǎn)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211 | 代理人： | 林娟 |
| 地址： | 214122 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 提高 唾液酸 乳糖 產(chǎn)量 基因工程 及其 生產(chǎn) 方法 | ||
1.一種生產(chǎn)唾液酸乳糖的基因工程菌，其特征在于，敲除β-半乳糖苷酶編碼基因lacZ，并異源表達(dá)編碼乙酰神經(jīng)氨酸合成酶的neuB基因、編碼N-乙酰葡萄糖胺異構(gòu)酶的neuC基因、編碼CMP-唾液酸合成酶的neuA基因、乳糖轉(zhuǎn)移酶編碼基因lacY、谷氨酰胺合成酶編碼基因glnA和UDP-乙酰葡糖胺合成途徑；過表達(dá)編碼唾液酸轉(zhuǎn)移酶基因；
所述UDP-乙酰葡糖胺合成途徑為葡萄糖胺-6-磷酸合成酶編碼基因glmS、葡萄糖胺合成酶編碼基因glmM和/或UDP-乙酰葡萄糖胺焦磷酸化酶編碼基因glmU。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌還敲除唾液酸醛縮酶編碼基因nanA、6-磷酸果糖激酶編碼基因pfkA和/或葡萄糖胺-6磷酸脫氨酶編碼基因nagB。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述唾液酸轉(zhuǎn)移酶基因?yàn)棣?2,3唾液酸轉(zhuǎn)移酶基因或α-2,6唾液酸轉(zhuǎn)移酶基因；
所述編碼α-2,3唾液酸轉(zhuǎn)移酶基因選自來源于腦膜炎奈瑟球菌Neisseriameningitidis的基因lst、來源于多殺性巴氏桿菌Pasteurellamultocida的基因Pm0188、突變體基因Pm0188*、來源于海藻百伯坦菌Bibersteiniatrehalosi的基因WQG、來源于淋病奈瑟菌Neisseriagonorrhoeae的基因Nst或突變體基因Nst*；
所述編碼α-2,6唾液酸轉(zhuǎn)移酶基因選自來源于光桿菌Photobacteriumsp.的基因pst6-224、來源于鰒發(fā)光桿菌Photobacteriumleiognathi的基因plst6、突變體基因plst6*來源于美人魚發(fā)光桿菌Photobacterium?damselae的基因bst或突變體基因bst*。
4.根據(jù)權(quán)利要求1～3任一所述的基因工程菌，其特征在于，利用pETDuet-1、pRSFDuet-1、pCDFDuet-1、pACYCDuet-1或pCOLADuet-1質(zhì)粒進(jìn)行過表達(dá)。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的基因工程菌，其特征在于，利用pETDuet-1或pACYCDuet-1過表達(dá)neuB基因、neuC基因、neuA基因和基因glnA，利用pRSFDuet-1或pCOLADuet-1過表達(dá)基因lacY和編碼唾液酸轉(zhuǎn)移酶基因，利用pCDFDuet-1過表達(dá)葡萄糖胺-6-磷酸合成酶編碼基因glmS、葡萄糖胺合成酶編碼基因glmM和/或UDP-乙酰葡萄糖胺焦磷酸化酶編碼基因glmU。
6.根據(jù)權(quán)利要求1～5任一所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌以大腸桿菌為宿主。
7.一種提高唾液酸乳糖產(chǎn)量的方法，其特征在于，敲除大腸桿菌基因組上β-半乳糖苷酶編碼基因lacZ、唾液酸醛縮酶編碼基因nanA、6-磷酸果糖激酶編碼基因pfkA和葡萄糖胺-6磷酸脫氨酶編碼基因nagB，利用表達(dá)載體異源表達(dá)乙酰神經(jīng)氨酸合成酶基因neuB、N-乙酰葡萄糖胺異構(gòu)酶基因neuC、CMP-唾液酸合成酶基因neuA、唾液酸轉(zhuǎn)移酶基因、乳糖轉(zhuǎn)移酶基因lacY、葡萄糖胺-6-磷酸合成酶基因glmS、葡萄糖胺合成酶基因glmM、UDP-乙酰葡萄糖胺焦磷酸化酶基因glmU和谷氨酰胺合成酶基因glnA。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，利用pETDuet-1、pRSFDuet-1、pCDFDuet-1、pACYCDuet-1或pCOLADuet-1質(zhì)粒進(jìn)行過表達(dá)。
9.一種生產(chǎn)唾液酸乳糖的方法，其特征在于，以甘油為碳源，以乳糖為底物，利用權(quán)利要求1～6任一所述基因工程菌為發(fā)酵菌株發(fā)酵生產(chǎn)唾液酸乳糖。
10.權(quán)利要求1～6任一所述基因工程菌，或權(quán)利要求7或8所述的方法在生產(chǎn)唾液酸乳糖及含有唾液酸乳糖的產(chǎn)品中的應(yīng)用。
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