[發明專利]Oligo (dT) beads試劑在富集和純化雙鏈DNA Poly A中的應用

在審

• 申請號: 202310266696.1
• 申請日: 2023-03-20
• 公開（公告）號: CN116574722A
• 公開（公告）日: 2023-08-11
• 發明（設計）人: 陳小梅;張偉;趙國鳳;李嬌
• 申請（專利權）人: 上海甲貝醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 上海三方專利事務所(普通合伙) 31127
• 代理人: 錢品興

本發明提供了一種Oligo(dT)beads試劑在富集和純化雙鏈DNAPoly?A中的應用方法，該方法包括：步驟S1，雙鏈DNA?Poly?A的富集純化：用與Oligo(dT)beads配套的Binding?Buffer清洗Oligo(dT)beads，收集Oligo(dT)beads，加入Binding?Buffer，加入含有雙鏈DNA?Poly?A的溶液混合均勻并反應一段時間，收集Oligo(dT)beads；步驟S2，雙鏈DNA?Poly?A的洗脫：向步驟S1最終收集到的Oligo(dT)beads中加入洗脫液，洗脫一段時間后，收集上清液，該上清液即含有富集純化到的雙鏈DNA?Poly?A。其中，Oligo(dT)beads為Oligo(dT)偶聯到瓊脂糖beads表面或Oligo(dT)偶聯到磁珠表面。本發明采用Oligo(dT)beads與雙鏈DNA?Poly?A混合孵育，實現從復雜體系中富集和純化雙鏈DNA?Poly?A的目的。本發明提供的應用方法，操作簡便，富集純化耗時短，便于通量操作。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及Oligo(dT)beads試劑在富集和純化雙鏈DNAPoly?A中的應用。

背景技術

Oligo(dT)磁珠為磁珠表面共價偶聯Oligo(dT)。磁珠尺寸均勻，在溶液中可靈活移動，這使得微珠捕獲表面能夠在mRNA捕獲階段與整個總RNA樣品快速連續地相互作用，進而Oligo(dT)與真核生物mRNA尾部的Poly?A互補配對，可用于高效地從任何總真核生物RNA或直接從動植物組織或細胞裂解物中快速分離出完整、高純度的mRNA。

Oligo(dT)磁珠的應用主要是利用Oligo(dT)磁珠與含有Poly?A的mRNA結合達到從復雜總mRNA中富集mRNA的目的(Genet?Mol?Biol.2023?Jan?6；45(4):e20210379；BiolProced?Online.2022?Dec?27；24(1):26)。Michael?Beverly(Anal?Bioanal?Chem.2018Feb；410(6):1667-1677)利用RNase?T1處理體外轉錄合成的mRNA，酶切得到游離的Poly?AmRNA片段，再利用Oligo(dT)磁珠從溶液中富集Poly?A?mRNA片段，進而利用質譜手段檢測出Poly?A?mRNA片段中A的數量。

目前市售的Oligo(dT)磁珠，如Thermo公司的Dynabeads^TM?mRNA純化試劑盒(用于從總RNA制備液中純化mRNA)，貨號61006；NEB公司的Oligo?d(T)25Magnetic?Beads，貨號S1419S；國產BEAVER公司的Oligo?dT磁珠，貨號70430-1。這些磁珠均用來富集和純化單鏈的富含Poly?A的mRNA。

發明內容

雙鏈DNA?Poly?A，即Poly?A片段為DNA，且該DNA片段含有雙鏈，其中一條鏈富含Poly?A，另外一條鏈為與Poly?A互補的Poly?T片段。本發明將Oligo(dT)beads用于富集和純化雙鏈DNA?Poly?A，提供了一種Oligo(dT)beads試劑在富集和純化雙鏈DNA?Poly?A中的應用方法。

本發明的具體技術方案如下：

本發明提供的Oligo(dT)beads試劑在富集和純化雙鏈DNA?Poly?A中的應用方法，其特征在于，包括如下步驟：步驟S1，雙鏈DNA?Poly?A的富集純化：用與Oligo(dT)beads配套的Binding?Buffer清洗Oligo(dT)beads，收集Oligo(dT)beads，加入Binding?Buffer，加入含有雙鏈DNA?Poly?A的溶液混合均勻并反應一段時間，收集Oligo(dT)beads；步驟S2，雙鏈DNA?Poly?A的洗脫：向步驟S1最終收集到的Oligo(dT)beads中加入洗脫液，洗脫一段時間后，收集上清液，該上清液即含有富集純化到的雙鏈DNA?Poly?A。