[發明專利]EGFR基因突變體的檢測方法及應用

在審

• 申請號: 202310258429.X
• 申請日: 2023-03-17
• 公開（公告）號: CN116284335A
• 公開（公告）日: 2023-06-23
• 發明（設計）人: 張洪磊;劉超;李高峰;王書廷
• 申請（專利權）人: 云南中醫藥大學
• 主分類號: C07K14/71
• 分類號: C07K14/71;C12Q1/6886;C12Q1/6858
• 代理公司: 成都九鼎天元知識產權代理有限公司 51214
• 代理人: 和占宏

1.一種EGFR基因突變體，其特征在于：所述EGFR基因突變體包括G719C突變體、G719A突變體、G719D突變體和G719S突變體，所述G719C突變體為c.G2155T突變，G719A突變體為c.G2156C突變，G719D突變體為c.G2156A突變，G719S突變體為c.G2155A突變。

2.根據權利要求1所述的EGFR基因突變體，其特征在于：所述EGFR基因突變體中EGFR基因的核苷酸序列為SEQ?ID?NO.6，G719C突變體的核苷酸序列為SEQ?ID?NO.7，G719A突變體的核苷酸序列為SEQ?ID?NO.8，G719D突變體的核苷酸序列為SEQ?ID?NO.9，G719S突變體的核苷酸序列為SEQ?ID?NO.10。

3.根據權利要求1所述的EGFR基因突變體，其特征在于：所述EGFR基因突變體中EGFR基因的氨基酸序列為SEQ?ID?NO.1，G719C突變體的氨基酸序列為SEQ?ID?NO.2，G719A突變體的氨基酸序列為SEQ?ID?NO.3，G719D突變體的氨基酸序列為SEQ?ID?NO.4，G719S突變體的氨基酸序列為SEQ?ID?NO.5。

4.一種檢測權利要求1所述的EGFR基因突變體的方法，其特征在于：其包括如下步驟：

從生物樣品中提取核苷酸樣本，序列擴增和DNA回收，一代測序法確定核苷酸序列，通過比較確定EGFR的突變形式。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于：所述生物樣品選自腫瘤樣本。

6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于：所述核苷酸樣本為全基因組DNA和引物序列擴增的DNA樣本。

7.一種檢測權利要求1所述的EGFR基因突變體的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括檢測EGFR基因突變體的試劑、DNA擴增的反應體系和反應條件。

8.根據權利要求7所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑選自核酸探針或引物；和/或，

所述引物包括正向引物A和反向引物B，所述正向引物A的核苷酸序列為SEQ?ID?NO.11，所述反向引物B的核苷酸序列為SEQ?ID?NO.12；和/或，

所述DNA擴增的反應體系由DNA模板、10μM的正向引物SEQ?ID?NO.11、10μM的反向引物SEQ?ID?NO.12、2×HiFiTaq?PCR?StarMix（Dye+）和無菌雙蒸水組成；和/或，

所述反應條件為94℃預變性2min，94℃變性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min，32個循環，72℃終延伸5min。

9.一種如權利要求7所述的試劑盒在制備肺癌突變檢測材料中的應用。